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过表达LncRNA GAS5对SD大鼠心肌成纤维细胞活化增殖的影响
目的 应用长链非编码RNA GAS5 (LncRNA GAS5)过表达质粒(pEGFP-C1-GAS5)转染SD大鼠心肌成纤维细胞,观察其对心肌成纤维细胞活化增殖的影响.方法 提取SD大鼠心肌成纤维细胞,转化生长因子β1 (TGF-β1)刺激其增殖,分为pEGFP-C1-GAS5组、阴性对照组和空白对照组,应用LncRNA GAS5基因的过表达质粒 (pEGFP-C1-GAS5)通过脂质体瞬时转染细胞,48 h后收获细胞.采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测GAS5、Ⅰ型胶原前胶原(Col1A1)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的mRNA表达,Western blot分析Col1A1和α-SMA蛋白表达变化,MTT法检测细胞增殖活力.结果 TGF-β1刺激心肌成纤维细胞后,qRT-PCR结果显示 LncRNA GAS5的表达量较正常组下降(P<0.05);与阴性对照组和空白对照组比较,转染了pEGFP-C1-GAS5的实验组,qRT-PCR结果显示实验组的GAS5表达均明显升高(P<0.05),同时α-SMA和Col1A1 mRNA表达显著降低(P<0.05);Western blot结果显示转染pEGFP-C1-GAS5的实验组α-SMA和Col1A1蛋白表达量均明显降低(P<0.05);MTT法检测结果表明在实验组心肌成纤维细胞的增殖活力低于阴性对照组和空白对照组(P<0.05).结论 过表达LncRNA GAS5可显著降低心肌成纤维细胞的增殖活力,提示GAS5有抑制心肌成纤维细胞的活化增殖的作用,为以后进一步研究提供依据.
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LncRNA GAS5对结肠癌细胞生长及化疗药物作用的影响
目的 检测长链非编码RNA生长抑制特异因子5(Lnc RNA GAS5)对结肠癌细胞的凋亡和生长的影响及其与化疗药物的敏感性是否有关联.方法 siRNA干扰结肠癌细胞株SW480 LncRNA GAS5基因,检测细胞的存活率,加入化疗药物5氟尿嘧啶(5-FU),检测细胞的克隆形成能力,流式细胞仪检测干扰前后细胞的凋亡.结果 siRNA干扰结肠癌细胞SW480 LncRNA GAS5基因后,加入化疗药物5氟尿嘧啶,敲除GAS5基因后癌细胞存活率比敲除GAS5基因前多,其差异具有统计学意义(P<0.05);敲除GAS5基因后,结肠癌细胞的克隆形成能力比敲除GAS5基因前强,其差异具有统计学意义(P<0.05);流式细胞仪检测敲除GAS5前后的结肠癌细胞,敲除GAS5后结肠癌细胞凋亡数量降低,其差异具有统计学意义(P<0.05).结论 GAS5可促进结肠癌细胞的凋亡;GAS5能促进化疗药物对结肠癌细胞的作用;GAS5可能作为抑癌基因存在于结肠癌细胞中,为结肠癌的分子靶向治疗提供依据.
关键词： 结肠癌 LncRNAGAS5 凋亡 增殖 5氟尿嘧啶
