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重组致密颗粒蛋白GRA5文献资料
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重组GRA5蛋白免疫诊断弓形虫病价值的研究
目的 原核表达的刚地弓形虫致密颗粒蛋白5(rGRA5)免疫诊断价值的探讨.方法 GRA5基因在RT-PCR被扩增,构建pET28a-GRA5原核表达载体,双核酸内酶切及序列测定进行鉴定,pET28a-GRA5IPTG诱导表达后,SDS-PAGE和Western blot法检测该重组蛋白的表达.建立以纯化的重组蛋白的间接ELISA法,检测收集样本血清中弓形虫特异性抗体.结果 PCR反应扩增出为363 bp大小的GRA5基因,所构建的pET28a-GRA5原核表达载体经双酶切显示插入片段大小与上相符,DNA测序结果表明与GenBank中录入的GRA5基因经Blast比对序列同源性100%,原核细胞表达的该重组蛋白在SDS-PAGE和Western blot中均有显示(约14 ku).本实验建立的ELISA法检测的100例弓形虫感染者(血清学阳性)血清中有73例呈阳性,阳性率为73.0%(73/100),其中40例IgG阳性标本的阳性率为72.5%(29/40),30例IgM阳性标本的阳性率为53.3%(16/30),30例IgG、IgM均阳性标本的阳性率为93.3%(28/30),30例阴性血清标本的阳性率仅为6.7%(2/30).结论 本实验获得的原核表达的rGRA5具有一定的弓形虫病免疫诊断的潜在价值.
关键词： 刚地弓形虫 重组致密颗粒蛋白GRA5 鉴定 酶联免疫吸附试验
