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N-乙酰-L-半胱氨酸减轻大鼠胃缺血/再灌注损伤的机制
为研究N-乙酰-L-半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)减轻大鼠胃缺血/再灌注(gastric ischemia/reperfusion,GI/R)损伤的机制,在大鼠股静脉注射NAC(150 mg/kg),夹闭大鼠腹腔动脉30 min,再灌注1 h制备GI/R模型.取胃后计数胃黏膜损伤指数(gastric mucosal damage index,GMDI),用原位检测(TUNEL)法观察胃黏膜细胞的凋亡,用免疫印迹法测定胃黏膜组织中p-ERK,p-JNK和NF-κB的表达,用RT-PCR法检测TNF-α,Caspase-3的mRNA表达.结果显示,NAC可以减轻GI/R损伤大鼠胃黏膜细胞的凋亡;促进大鼠I/R损伤的胃黏膜组织中p-ERK蛋白的表达,抑制p-JNK和NF-κB的蛋白表达,同时也抑制TNF-α mRNA和Caspase-3 mRNA的表达.股静脉给予辣椒素受体(vanilloid receptor subtype 1,VR1)拮抗剂(capsaizepin,CPZ)400 mg/kg,能逆转NAC对大鼠GI/R损伤的保护作用.以上结果提示:NAC对大鼠GI/R损伤具有减轻作用,其保护机制可能是通过上调胃黏膜组织中p-ERK,下调p-JNK和NF-κB实现的,且这种保护作用可能与VR1有关.
关键词： N-乙酰-L-半胱氨酸 胃缺血/再灌注 凋亡 辣椒素受体 大鼠 -
NF-κB在模拟缺血/再灌注诱导人离体胃黏膜上皮细胞凋亡中的作用
目的 观察核因子κB(NF-κB)在模拟缺血/再灌注诱导人离体胃黏膜上皮细胞凋亡中活性的变化,并进一步阐明其作用.方法 采用人胃黏膜上皮细胞株进行体外培养并传代,细胞以缺氧(5% CO2、1% O2、94% N2)+无糖KR液模拟缺血、缺氧,复氧、复糖模拟再灌注诱导胃黏膜上皮细胞凋亡,用流式细胞术、免疫组化法、免疫印迹法观察正常对照组、模拟缺血/再灌注损伤组(I-R组)、NF-κB的抑制剂PDTC预处理组(使用10 μmol·L-1PDTC预处理胃黏膜上皮细胞24 h)于模拟缺血1 h、再灌注6 h后细胞凋亡及NF-κB的表达情况.结果 ①I-R组细胞凋亡率较正常对照组明显增高(P<0.01),PDTC预处理组细胞凋亡率较I-R组明显下降(P<0.01).②正常对照组胃黏膜上皮细胞核内极少有NF-κB表达,I-R组细胞核内NF-κB表达明显增加,PDTC预处理组NF-κB核转位现象减轻,胞核染色明显减少.③I-R组与正常对照组比较,胃黏膜上皮细胞核NF-κB蛋白表达水平显著增高(P<0.01);PDTC预处理组与I-R组比较,NF-κB蛋白表达水平明显降低(P<0.01).结论 模拟缺血/再灌注能增加人胃黏膜上皮细胞核内NF-κB的表达,NF-κB的激活具有促进细胞凋亡的作用;PDTC可以抑制细胞凋亡,对人胃黏膜上皮细胞模拟缺血/再灌注损伤有保护作用.
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模拟缺血/再灌注诱导人离体胃黏膜上皮细胞的凋亡
目的 模拟缺血/再灌注诱导人离体的胃黏膜上皮细胞损伤模型,观察再灌注不同时间点胃黏膜上皮细胞凋亡情况并分析其规律.方法 采用人胃黏膜上皮细胞株进行体外培养并传代,细胞以缺氧(5% CO2、1% O2、94% N2)+无糖KR液模拟缺血、缺氧,复氧、复糖模拟再灌注诱导胃黏膜上皮细胞凋亡,用流式细胞仪、Hoechst33258染色法观察正常对照组及模拟损伤组于模拟缺血1 h,再灌注3、6、12 h细胞凋亡的情况及变化规律.结果 ①胃黏膜上皮细胞12～24 h贴壁,24 h后有少量上皮样细胞从周边爬出,48 h后细胞呈指数样生长,72 h后细胞已基本能达到融合.②模拟胃缺血/再灌注后细胞凋亡率于缺血1 h、再灌注6 h时出现高峰,且与正常对照组相比差异有统计学意义(P<0.01).经Hoechst33258染色,荧光显微镜下观察可见细胞于缺血1 h、再灌注6 h时产生典型的凋亡形态学变化如核浓染、核碎裂、边集等.结论 成功模拟了缺血/再灌注诱导人离体的胃黏膜上皮细胞损伤模型;该损伤模型可引起胃黏膜上皮细胞的凋亡,且在缺血1 h、再灌注6 h时为高峰.
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缺血后处理对缺血/再灌注胃黏膜自由基损伤的影响
目的 研究缺血后处理(ischemic post-conditioning, I-postC)对大鼠胃缺血/再灌注(gastric ischemia/reperfusion, GI/R)损伤的影响.方法 健康SD大鼠18只,随机分为3组,即对照组、缺血/再灌注组、缺血后处理组,分别检测大鼠胃黏膜损伤指数(GMDI)及胃黏膜组织抑制羟自由基能力、黄嘌呤氧化酶(XOD)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量.结果 缺血/再灌注可造成胃黏膜明显损伤;缺血后处理明显减轻GI/R损伤,并使胃黏膜组织抑制羟自由基能力、SOD含量增加,XOD、MDA明显降低.结论 缺血后处理减轻大鼠胃缺血/再灌注损伤,其保护机制与减轻缺血/再灌注胃黏膜自由基损伤有关.
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室旁核注射apelin-13对大鼠胃缺血/再灌注损伤的影响
目的 研究室旁核注射apelin-13对胃缺血/再灌注(GI/R)损伤的作用及细胞机制.方法 室旁核注射apelin-13,制备GI/R模型;用Western-blot方法检测胃黏膜细胞的凋亡以及凋亡相关基因c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)的磷酸化水平.结果 与单纯GI/R组相比,室旁核注射apelin-13能明显增加GI/R后胃黏膜细胞的损伤,同时可以升高caspase-3蛋白表达及JNK的磷酸化水平.结论 室旁核注射apelin-13对大鼠GI/R损伤具有加重作用.
关键词： Apelin-13 室旁核 胃缺血/再灌注 细胞凋亡 c-Jun氨基末端激酶 -
室旁核内血管紧张素Ⅱ对大鼠胃缺血/再灌注后胃黏膜NF—κB表达的影响
目的 研究室旁核(paraventricular nucleus,PVN)内注射血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,AngⅡ)对大鼠胃缺血/再灌注(gastric ischemia/reperfusion,GI/R)后的胃黏膜核因子κB(NF-κB)表达的影响.方法 采用核团微量注射法以及夹闭大鼠腹腔动脉30 min后松开动脉夹血流复灌1 h的GI/R模型,计数胃黏膜损伤指数并应用免疫组化方法检测胃黏膜NF-κB p65的表达.结果 ①GI/R可引起胃黏膜损伤,PVN内微量注射Ang Ⅱ(0.3 μl含30 ng)后GI/R损伤显著减轻;侧脑室注射(icy)AngⅡ受体拮抗剂洛沙坦,能阻断AngⅡ对GI/R损伤的保护作用,使GI/R损伤明显加重;②正常大鼠胃黏膜可见NF-κB表达,并主要在胞质表达;GI/R后,NF-κB表达增多,尤其是胞核表达明显增加;PVN内微量注射AngⅡ后,可使胃黏膜NF-κB表达量减少;icv给予洛沙坦可阻断AngⅡ的效应,即GI/R损伤后胃黏膜NF-κB阳性细胞数表达量增加.结论 PVN内微量注射AngⅡ对大鼠GI/R损伤有明显的保护作用,且该作用可被洛沙坦翻转;NF-κB在PVN内微量注射AngⅡ减轻大鼠GI/R损伤过程中可能发挥着重要作用.
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吡咯烷二硫氨基甲酸酯对大鼠胃缺血/再灌注损伤的影响
目的 研究核因子κB(NF-κB)抑制剂吡咯烷二硫氨基甲酸酯(PDTC)对大鼠胃缺血/再灌注(gastricischemia/reperfusion.GI/R)损伤的影响.方法 采用夹闭大鼠腹腔动脉30 min,去除动脉夹再灌注1 h的GI/R损伤模型,于静脉注射PDTC后,肉眼计数胃黏膜损伤指数,并运用免疫组化及TdT介导dUTP缺口末端标记(TUNEL)实验技术,观察PDTC对大鼠GI/R后胃黏膜细胞坏死、增殖和凋亡的影响.结果 夹闭大鼠腹腔动脉30 min再灌注1 h后可造成胃黏膜明显损伤,静脉注射PDTC 200 mr/ks可明显减轻GI/R损伤,并使胃黏膜细胞增殖增加、凋亡减少.结论 静脉注射PDTC对GI/R损伤具有保护作用,这种保护作用是通过促进胃黏膜细胞增殖、抑制胃黏膜细胞凋亡而实现的.
关键词： 胃缺血/再灌注 吡咯烷二硫氨基甲酸酯 增殖 凋亡 -
N-乙酰-L-半胱氨酸对大鼠胃缺血/再灌注损伤的影响
目的 研究抗氧化剂N-乙酰-L-半胱氨酸(N-acetyleysteine,NAC)对胃缺血/灌注(gastric ischemia/reperfusion,GI/R)损伤的影响.方法 采用股静脉注射NAC后,夹闭大鼠腹腔动脉30 min,再灌注1 h的GI/R模型,计数胃黏膜损伤指数(gastric mueosal damage index,GMDI),测定胃黏膜组织中丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性,RT-PCR法检测凋亡相关因子环氧合酶-2(COX-2)的表达.结果 股静脉注射NAC能降低GI/R胃黏膜损伤指数,使胃黏膜组织中MDA含量减少,SOD活性增强,凋亡相关因子COX-2的表达减少.结论 NAC对大鼠GI/R损伤具有保护作用,这种保护作用是通过抑制氧化应激,减少胃黏膜细胞凋亡而实现的.
关键词： N-乙酰-L-半胱氨 胃缺血/再灌注 胃黏膜损伤指数 超氧化物歧化酶 -
室旁核内微量注射催产素对大鼠胃缺血/再灌注后胃黏膜胃泌素表达的影响
目的 研究室旁核(paraventricular nucleus,PVN)内微量注射催产素(oxytocin,OT)对大鼠胃缺血/再灌注(gastric ischemia/reperfusion,GI/R)后胃黏膜细胞胃泌素表达的影响.方法 采用夹闭大鼠腹腔动脉30 min,去除动脉夹再灌注1 h的GI/R损伤模型,于单侧PVN微量注射OT.肉眼计数胃黏膜损伤指数,并运用免疫组化实验技术观察了PVN微量注射OT对胃黏膜细胞胃泌素蛋白表达的影响.结果 PVN微量注射OT可明显减轻GI/R损伤;PVN内微量注射OT能明显减少GI/R后胃黏膜细胞胃泌素的表达,侧脑室给予OT特异性拮掂剂atosiban后阻断OT对大鼠GI/R损伤的保护作用并使胃泌素的表达增加.结论 PVN微量注射OT后对GI/R损伤具有显著的保护作用,这种保护作用在脑内是由OT受体介导的,在胃黏膜局部与抑制胃黏膜细胞胃泌素的表达有关.
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姜黄素调控 Bcl －2和 Bax 蛋白表达减轻胃缺血／再灌注损伤
目的：观察姜黄素预处理对大鼠胃缺血／再灌注（gastric ischemia －reperfusion，GI／R）损伤的保护作用。方法采用夹闭大鼠腹腔动脉30 min 再灌注1 h 建立 GI／R 损伤模型。应用计算机软件分析计算 GI／R 引起的胃黏膜损伤面积，根据 whtie 评分法计算胃黏膜损伤指数，用免疫组化法与图像分析技术检测胃黏膜组织 B 细胞淋巴瘤因子2（Bcl －2）与 Bcl －2相关 X 蛋白（Bax）表达量。结果与对照组相比，GI／R 组胃黏膜损伤面积和损伤指数明显增加（P ＜0．05，P ＜0．01）；姜黄素预处理能够有效减轻 GI／R 引起的胃黏膜损伤，随着姜黄素浓度的增加，GI／R 引起的胃黏膜损伤面积和损伤指数显著减少，并具有浓度依赖性（P ＜0．05，P ＜0．01）。同时，姜黄素预处理能够降低 GI／R 引起的胃黏膜组织 Bax 蛋白表达，增加胃黏膜组织 Bcl －2蛋白表达，且随着姜黄素浓度的增加，其差异具有浓度依赖性（P ＜0．05，P ＜0．01）。结论姜黄素预处理通过增加抗凋亡蛋白 Bcl －2、减少促凋亡蛋白 Bax 的表达有效抑制 GI／R 引起的胃黏膜损伤，对胃黏膜起到一定程度的保护作用，对临床缺血／再灌注引起的器官损伤具有潜在的治疗作用。
