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原位转染文献资料
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phVEGF165原位转染缺血肌肉后hVEGF及其蛋白的表达
目的探讨慢性下肢动脉缺血的基因治疗. 方法选用血管内皮生长因子(VEGF)作为治疗基因,通过建立实验兔慢性下肢动脉缺血模型,将构建的人VEGF165cDNA真核表达载体phVEGF165注入缺血肌肉内,采用RT-PCR和原位杂交法测定肌肉内hVEGF165基因表达,采用免疫组化和Western印迹法测定其蛋白产物的表达.结果骨骼肌细胞外源性hVEGF165基因表达量于注射后1周达到高峰,持续2～3周.蛋白表达于注射后2周达到高峰,维持至注射后4周. 结论骨骼肌细胞能摄取并表达外源性hVEGF165基因,并能进一步合成分泌hVEG165蛋白.phVEGF165肌肉直接注射的作用时间有限、范围局限,使用安全性较高.
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pSV-VEGF165肌内原位注射促进兔缺血后肢侧支血管形成
目的为临床探索一种更简便安全的下肢动脉缺血性疾病的基因治疗途径.方法建立兔后肢缺血动物模型,将体外构建的重组质粒pSV-VEGF165注射于缺血肌群,30 d后行动脉造影并切取标本,测定毛细血管密度和毛细血管/肌肉数比值 .结果经pSV-VEGF165治疗后,缺血肢体毛细血管密度和毛细血管/肌肉数比值显著增加,小腿部位比大腿部位增加明显;动脉造影显示部分缺血肢体侧支动脉明显增多.结论肌肉内原位注射pSV-VEGF165是一种简单有效的治疗基因转染途径,能显著增加缺血肢体侧支血管形成.
关键词： 血管内皮细胞生长因子 重组质粒 原位转染 基因治疗 动脉闭塞性疾病
