首页 > 文献资料
-
人血管内皮抑素的基因克隆和表达载体构建及纯化
目的克隆人血管内皮抑素基因(endostatin),纯化其表达蛋白并初步检测纯化蛋白的生物学活性.方法用PCR技术从正常成人肝cDNA库扩增出人血管内皮抑素基因,将其克隆进pBluescript中测定其核苷酸序列.构建大肠杆菌分泌性表达载体pET-22b(+)-endostatin-6xHis,IPTG诱导表达,经Ni2+-IDA Sepharose 6B亲和纯化该表达蛋白,并采用血管内皮细胞增殖抑制试验检测其活性.结果经PCR扩增成功获得551bp的人血管内皮抑素基因,测序正确,在大肠杆菌中表达后,该表达蛋白的表达量占菌体总蛋白的10%.SDS-PAGE和Western blot显示其分子量为21kd.经亲和纯化后的endostatin-6xHis纯度可达90%,得率为0.3mg/100ml,并且具有抑制血管内皮细胞增殖的活性,达到50%的抑制率需endostatin-6xHis浓度为600ng/ml.结论endostatin基因克隆、表达和纯化的成功,为采用抗血管生成方法治疗裸鼠肿瘤模型和肿瘤病人的研究奠定了基础.
-
肝动脉化疗栓塞加重组人血管内皮抑素治疗原发性肝癌临床观察
目的:探讨肝动脉化疗栓塞术联合重组人血管内皮抑素(恩度)治疗原发性肝癌的临床疗效.方法:回顾性分析80例原发性肝癌患者的临床资料,均行肝动脉栓塞术治疗,其中42例患者术中加用重组人血管内皮抑素,记为观察组,另38例患者术后常规治疗,术后随访3个月,应用双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清VEGF,比较两组患者的近期缓解率及VEGF水平变化.结果:观察组近期缓解率高、VEGF水平明显降低,与对照组患者比较有明显差异(P＜0.05).结论:肝动脉栓塞联合恩度能明显改善患者近期缓解率,减少肿瘤血供,提高肝动脉栓塞的疗效,值得在临床推广.
-
人血管内皮抑素毕赤酵母真核系统的建立
目的 构建人血管内皮抑素(ES)毕赤酵母真核表达系统.方法 利用RT-PCR技术从人体肝脏组织扩增出ES基因,插入毕赤酵母表达载体pPIC9中,酶切鉴定并进行DNA测序鉴定.结果 成功克隆ES基因并筛选出pPIC9载体中的ES阳性克隆,测序证实其序列与已报道的ES基因序列一致.结论 用分子生物学方法构建ES毕赤酵母真核表达载体的成功,使高效表达ES蛋白成为可能,并为采用抗血管生成方法治疗恶性肿瘤的研究奠定了基础.
