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定量RT-PCR法对"苦参"在心肌炎模型中药效学研究
目的用定量RT-PCR法检测"苦参"中抗柯萨奇B病毒有效成份"抗柯注射液",在Balb/c小鼠病毒性心肌炎模型病毒血症时,对抗"柯萨奇B病毒"的药效.方法取48只雄性18～22g8周龄的Balb/c小鼠,随机分成A～H共8组,每组6只.1.各治疗组(A～F组),每只小鼠从腹腔接种0.1ml104TCID50CVB3m病毒2h后,每天从尾静脉分别注射抗柯注射液,5、10、15、20、25、30mg/kg,2次/d,连续用药3d.2.病毒组(G组),注射病毒同上法,2h后从尾静脉注入0.3ml无菌生理盐水,2次/d,连续3d.3.空白对照组(H组),腹腔内注射无小牛血清的RPMI-1640培养液,2h后从尾静脉注入0.3ml无菌生理盐水,2次/d,连续3d.结果空白组CVB-RNA(-)对接种CVB3m感染后用不同剂量"抗柯注射液"治疗的各小组血液中CVB3m-RNA含量与病毒组相比明显下降,其抑制率(%)与所用抗柯注射液的剂量呈正比,即"抗柯"剂量增加,CVB3m-RNA含量下降的幅度亦增加,每天5～30mg/kg中的各剂量都有明显抑制病毒增殖的作用.结论用定量RT-PCR法检测到"抗柯注射液"对Balb/c小鼠病毒性心肌炎病毒血症时效果明显,小有效剂量为5mg@kg-1@d-1.
关键词： 苦参 抗柯注射液 柯萨奇B病毒 定量RT-PCR 病毒性心肌炎小鼠模型 -
苦瓜蛋白对柯萨奇B3病毒性心肌炎小鼠半胱天冬酶3活性及凋亡的抑制作用
为研究苦瓜蛋白对凋亡的关键酶半胱天冬酶3及凋亡的调节作用,用已经建立起来的方法从苦瓜果肉中提取苦瓜蛋白.将BALB/C小鼠分为4组:病毒对照组、正常对照组、药物对照组和药物治疗组,分别在第0天、第3天、第7天和第14天各处死5只小鼠,第21天全部处死动物,心肌组织半胱天冬酶3活性测定按照CALBIOCHEM公司的试剂说明书进行,并稍加改正,凋亡鉴定按照Oncogene公司的TdT-DNA裂解片断末端原位标记试剂说明书进行.结果发现,①病毒对照组第7天开始出现半胱天冬酶3活性(0.63±0.21 pmol/min,n=5),第14天的活性(10.9±1.5 pmol/min,n=5)显著高于第7天,第21天的活性(12.6±1.3 pmol/min,n=5)又高于第14天.②药物治疗组,只有一个第21天的标本有半胱天冬酶3活性(0.41 pmol/min),其它两组均未检测到此酶的活性.③DNA裂解片断末端原位标记法发现,病毒对照组在第7天心肌中有少数细胞凋亡,第14天、第21天凋亡细胞明显增多,在非病变区域可发现单个凋亡的心肌细胞.治疗组未发现凋亡细胞,其它两组也未发现凋亡细胞.结果提示,CVB3病毒性心肌炎中发现有明显的凋亡现象,凋亡和半胱天冬酶3发现于第7天,且随着时间增加而逐渐加重(增强);苦瓜蛋白可显著抑制半胱天冬酶3和凋亡.
