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EGFR胞内酪氨酸激酶结构域在人肿瘤细胞中的稳定表达
目的:探讨在人肿瘤细胞中稳定表达EGFR-TKD的方法.方法:采用磷酸钙共沉淀基因转染技术,将已构建的pEF-BOS/GST-EGFR-TKD质粒DNA与pBabe-puro质粒DNA共同导入体外培养的人非小细胞肺癌细胞系H1299中.加入嘌呤霉素,对转染的细胞加压筛选,以获得成功转染的细胞.免疫荧光法对重组质粒在H1299中的表达水平及定位进行检测.结果:经嘌呤霉素筛选,8d后对照组细胞全部死亡.转染组部分细胞存活,形成单克隆集落,经多次传代培养后,荧光显微镜下观察见多数集落的细胞胞质内表达GST-EGFR-TKD.结论:通过磷酸钙共沉淀法可成功转染H1299细胞,获得稳定表达EGFR-TKD的人肿瘤细胞.
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急性髓系白血病FLT3基因突变研究进展
急性髓系白血病（acute myelocytic leukemia ，AML）是由髓系造血干／祖细胞起源的一组在临床及遗传学上均有高度异质性的克隆性疾病，是成人急性白血病的主要类型，分类复杂，发病机制至今尚未完全明确。目前认为其发病机制主要包括染色体易位或缺失、原癌基因及抑癌基因突变等，但其独特的细胞遗传学和分子遗传学改变是分类的基础，对疾病诊断、预后分层、微小残留病灶监测，以及靶向治疗的开发等具有极为重要的意义。近年来人们在AML中发现了越来越多的分子异常，例如NPM1、FLT3的内部串联重复序列（FLT3‐ITD）、C‐KIT等基因突变，在 AML 的分层治疗中具有重要意义［1］，而FLT3／ITD 是 AML 中常见基因突变之一，该突变在AML发病机制中起驱动作用［2］，是提示预后不良的标志［3］，动态检测AML患者治疗前后Fms样酪氨酸激酶‐3（FLT3）表达水平，可作为判断 AML 预后和监测微小残留病灶的一项指标。目前，在 FLT3‐ITD阳性 AML患者治疗方面，化疗和自体干细胞移植的疗效均不理想，异基因造血干细胞移植的疗效尚存在争议，靶向治疗越来越受到人们的关注，也取得了一定疗效，然而随着耐药的出现，克服耐药的靶向药物治疗是人们面临的一大挑战，是治疗FLT3‐ITD阳性的AML患者的新方向。现简要综述AML中FLT3基因突变的临床意义、检测方法及治疗的新研究进展。
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中国人先天性无痛无汗症家系一个新的NTRK1基因突变
目的 对一个先天性无痛无汗症(congenital insensitivity to pain with anhidrosis,CIPA)家系神经营养性酪氨酸激酶受体1型基因(neurotrophic tyrosine kinase receptor type 1,NTRK1)进行基因突变分析.方法 抽取先证者以及其他家系成员的外周血标本.常规提取DNA,PCR扩增NTRK1基因17个外显子及外显子-内含子交界区域并直接测序,评估突变的致病性.结果 在先证者NTRK1基因第16外显子内发现1个新的插入性移码突变:c.2086_2087insC (p.Arg696 fsx)突变,该突变引起开放阅读框架改变,提前引入终止密码子,导致一个C端缺失72个氨基酸残基的截短蛋白产生,部分酪氨酸激酶结构域(tyrosine kinase domain,TKD)丢失.先证者之父母、祖母、外祖母为c.2086_2087insC(p.Arg696 fsx)突变携带者,其他家系成员未见NTRK1基因突变.结论 对CIPA家系进行NTRK1基因突变分析,发现1个新的NTRK1基因突变.
关键词： NTRK1基因 先天性无汗疼痛不敏感 突变 酪氨酸激酶结构域 -
KRAS突变在非小细胞肺癌中的研究进展
一些非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)存在某个特定突变基因,它被认为是导致癌症的主要启动基因.肺癌中两个常见的突变基因分别编码表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)和KRAS.EGFR酪氨酸激酶结构域突变近才确定,但它已被临床确立为评估表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(吉非替尼和厄洛替尼)治疗敏感性的有效预测指标.
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吉非替尼致急性肺损伤——附1例报道
吉非替尼是一种口服的表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(epidermal growth factor receptor-tyrosine kinase inhibitor, EGFR-TKI),能与三磷酸腺苷(adenosine triphosphate, ATP)竞争酪氨酸激酶结构域中的ATP结合位点,抑制其磷酸化,从而阻断肿瘤细胞信号传导通路,抑制肿瘤细胞的生长、转移.
