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缺陷株文献资料
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用四环素诱导调控表达系统构建弓形虫脂肪酸合成酶FABZ缺陷株
目的 构建基于四环素诱导调控表达系统的刚地弓形虫β-酮脂酰ACP合成酶(FABZ)缺陷株. 方法 从弓形虫基因组中扩增fabz基因并构建四环素调控诱导表达载体pTetO7-Sag1-FABZ-Ty-DHFR,电穿孔法导入弓形虫TATi株,通过乙胺嘧啶抗性和极限稀释法筛选FABZ缺陷株,蛋白质印迹(Western blotting)检测虫体内附加表位标签Ty的表达.在5×105个FABZ缺陷株弓形虫速殖子培养液中加入脱水四环素(终浓度为1μg/ml),Western blotting 检测带有Ty标签的FABZ表达情况. 结果 筛选获得的缺陷株可表达带有Ty标签的转运肽型FABZ和成熟型FABZ.FABZ缺陷株弓形虫速殖子培养液中加入脱水四环素24 h和48 h后,转运肽型FABZ表达量均较对照组显著降低(P＜0.05). 结论 构建了由脱水四环素调控表达的弓形虫FABZ缺陷株.
关键词： 刚地弓形虫 脂肪酸代谢酶 四环素诱导调控表达系统 缺陷株
