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胃癌血管靶向肽GX1抑制人胃癌血管内皮细胞增殖的机制研究
背景:为提高胃癌血管抑制治疗的选择性,本课题前期研究应用噬菌体呈现肽库技术筛选获得了人胃癌血管靶向性环七肽GX1,并发现GX1能抑制人胃癌血管内皮细胞增殖,诱导细胞凋亡.目的:探讨GX1抑制人胃癌血管内皮细胞增殖的相关机制.方法:分别以40 μmol/L GX1和40 μmol/L对照肽Pep2处理正常人脐静脉内皮细胞( HUVEC)和与人胃腺癌细胞株SGC7901体外共培养、产生肿瘤血管内皮相关特征的co-HUVEC.流式细胞术检测细胞周期分布,基因芯片检测筛选GX1组与对照肽Pep2组co-HUVEC差异表达基因并行GO分类,蛋白质印迹法检测凋亡相关基因蛋白表达.结果:与对照肽Pep2相比,GX1对co-HUVEC和正常HUVEC的细胞周期分布均无明显影响(P＞0.05).两组co-HUVEC共存在三百余个显著差异表达基因,其中与肿瘤生长、侵袭、转移相关者一百余个,功能主要涉及信号转导、凋亡、应激、细胞黏附、细胞代谢等.GX1组co-HUVEC的Bax、Cleaved Caspase-3蛋白表达明显上调,Bcl-2蛋白表达明显下调,Caspase-8蛋白表达无明显变化.结论:GX1可能通过下调Bcl-2/Bax比值,经线粒体途径诱导靶细胞凋亡,实现对人胃癌血管内皮细胞增殖的抑制作用.
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人67 LR噬菌体结合肽的筛选与功能分析
目的 为了获得能够与人67 ku层黏连蛋白受体(67 ku laminin receptor,67 LR)特异性结合的噬菌体呈现肽.方法 以重组人67LR蛋白为诱饵,分别对噬菌体12肽库和环7肽库进行亲和凝胶筛选,ELISA测定所筛选噬菌体克隆与靶蛋白的亲和力,经测序分析得到67 LR特异性结合噬菌体克隆,并通过293细胞侵袭转移实验测定阳性噬菌体呈现肽对67LR促细胞侵袭作用的抑制效果.结果 经4轮筛选共筛到2类新的67LR结合肽,分别具有DXCETCT(X可变)和YRPMXEY(X可变)一致序列.其中DX-CETCT噬菌体呈现肽可显著抑制67 LR所诱导的细胞侵袭,且这种抑制作用与YIGSR 5肽具有一定互补性.结论 成功筛选到2类新的67 LR结合肽,其中DXCETCT噬菌体呈现肽可针对性抑制67LR所诱导的细胞侵袭作用.
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胃癌肝高转移细胞结合肽的特异性鉴定
目的鉴定选择性噬菌体阳性克隆是否可与胃癌肝高转移细胞-XGC9811-L特异性结合.方法利用竞争结合试验检测噬菌体阳性克隆与XGC9811-L细胞的结合效率.竞争抑制实验确定阳性噬菌体与靶细胞的结合性是否通过外源呈现肽发挥作用.细胞结合ELI-ISA实验和免疫荧光技术鉴定phage20与靶细胞XGC9811-L结合的特异性.结果在8个阳性克隆中,phage20与XGC9811-L细胞的结合效率高,达100%,是原噬菌体肽库的50倍,随着外源呈现肽浓度的增加,phage20与靶细胞的结合力随之减弱.phage20可与XGC9811-L特异结合,并可内化入细胞.结论在8个噬菌体阳性克隆中,phage20与XGC9811-L细胞具有高度结合力,并呈现出明显的细胞特异性.
