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尖吻蝮蛇舌状虫粗抗原诊断价值的初步研究
目的 建立一种快速、简便、灵敏和特异的舌形虫病血清学诊断方法 .方法 从人工感染尖吻蝮蛇舌状虫虫卵3个月的KM小鼠中分离尖吻蝮蛇舌状虫若虫,制备粗抗原,进行SDS-PAGE鉴定分析.用该粗抗原ELISA检测舌形虫病患者、不同寄生虫病患者和尖吻蝮蛇舌状虫实验感染小鼠血清特异性IgG抗体,其中舌形虫病患者血清I份,血吸虫病患者血清13份,囊尾蚴、并殖吸虫、肝吸虫和旋毛虫等病患者血清各5份,丝虫、裂头蚴病患者血清各1份,正常人血清10份以及舌形虫感染不同时间段的小鼠血清30份.结果舌形虫若虫粗抗原浓度为37.9 ms/ml,SDS-PAGE鉴定分析,可见4条清晰的条带,相对分子质量为16000～150000.舌形虫病患者和29份舌形虫感染小鼠血清检查结果均为阳性,其他寄生虫病患者血清检查结果均为阴性.结论 初步建立了基于尖吻蝮蛇舌状虫若虫粗抗原检测舌形虫病的ELISA方法 ,为该病临床诊断、疾病预防控制及试剂盒的研制提供依据和奠定了基础.
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蛔虫粗抗原对人肺腺癌细胞凋亡中白细胞介素6和转化生长因子β分泌的影响
目的 探讨蛔虫粗抗原对人肺腺癌细胞株(A549)凋亡,以及白细胞介素(IL-6)和转化生长因子β(rGF-β)分泌的影响. 方法 收集新鲜蛔虫虫体,制备蛔虫粗抗原.将A549细胞分别与低、中、高浓度的蛔虫粗抗原(蛋白浓度分别为25、125和500 μg/ml)共培养,即低浓度组、中浓度组和高浓度组,同时设A549细胞+培养液的阴性对照组和阿霉素阳性对照组.用流式细胞术、ELISA和实时定量PCR (qPCR)分别检测作用1、18和24 h后A549细胞凋亡率和细胞周期,以及IL-6和TGF-β细胞因子水平和mRNA水平. 结果 3个浓度的蛔虫粗抗原作用于细胞1、18和24 h后,细胞凋亡率均显著高于同时间点的阴性对照组(P＜0.01).其中,中浓度组作用18h后细胞凋亡率高,为(47.10±3.68)％.细胞周期检测结果显示,中浓度组作用18h后,G0/G1期细胞比例升高,S期细胞比例下降,与阴性对照组间差异有统计学意义(P＜0.01).ELISA检测结果显示,相同作用时间下,A549细胞IL-6水平大多随蛔虫粗抗原作用浓度的增加而升高,TGF-β水平随着蛔虫粗抗原浓度和作用时间的不同,无明显的变化趋势.qPCR结果显示,中浓度组A549细胞的IL-6和TGF-p mRNA水平在作用18 h后达到高,分别为5.95±0.31和3.43±0.35,且显著高于阴性对照组(P＜0.01). 结论蛔虫粗抗原可诱导A549细胞凋亡,并将细胞阻滞在G0/G1期,其调节过程可能有IL-6和TGF-β的参与.
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日本血吸虫病混合型诊断抗原的制备及实验室检测
血吸虫病目前依然是严重的全球性社会公共卫生问题[1],WHO 估计全球有6 亿人受到血吸虫感染的威胁,2 亿人受到感染,1.2 亿人出现临床症状,其中2 千万人病情严重,年死亡人数多达数十万[2~4],我国是受日本血吸虫病危害为严重的国家之一[5],因此早期诊断血吸虫病对防治尤为重要.当前免疫诊断血吸虫病使用多的还是单一的诊断抗原,很难达到同时具有早期、敏感、特异性诊断的要求,因此制备一种具有上述要求的混合型诊断抗原试剂显得尤为重要,本研究制备了虫卵和成虫的混合型粗抗原,并进行了实验室检测,现将结果报告如下.
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重组抗原用于日本血吸虫病免疫诊断研究进展
目前,用于血吸虫病免疫诊断的常用的抗原是成虫抗原和虫卵抗原,由于这两种粗抗原的成分复杂,且与其他寄生虫感染血清存在着较严重的交叉反应,血吸虫病诊断的特异性不高,生产的试剂不宜标准化.
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尖吻蝮蛇舌形虫若虫粗抗原诊断效果及组分分析
目的 分析尖吻蝮蛇舌形虫若虫粗抗原的蛋白组成、免疫特性及在舌形虫病诊断中的诊断效果.方法 自感染尖吻蝮蛇舌形虫虫卵4个月的小鼠体内取尖吻蝮蛇舌形虫若虫,匀浆,用盐析法制备抗原.以此粗制抗原包被微量反应板,用间接ELISA方法检测尖吻蝮蛇舌形虫病人、感染小鼠及其它寄生虫病人血清中的特异性IgG抗体.用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫印迹(Western Blot)技术分析该粗制抗原的有效抗原蛋白组分.结果 ELISA方法检测尖吻蝮蛇舌形虫病人血清5份,正常人血清17份,感染小鼠、血吸虫病、肺吸虫病、肝吸虫病、囊虫病、旋毛虫病病人血清各20份,蛔虫病、钩虫病、鞭虫病病人血清各10份,发现舌形虫病人和感染小鼠血清均为阳性,其它寄生虫病人血清均为阴性.经SDS-PAGE和Western Blot分析,尖吻蝮蛇舌形虫成虫粗抗原可见5条主带和14条次带(Mr 16-200 kDa);若虫粗抗原可见9条主带和13条次带(Mr 16-150 kDa),其中有16条特异性条带可被感染小鼠血清识别,5条特异性条带可被舌形虫病人血清识别,与肺吸虫病、鞭虫病病人血清在约Mr 34 kDa附近处出现较微弱的交叉反应带,同其它寄生虫病人血清未出现交叉反应带.结论 尖吻蝮蛇舌形虫若虫粗抗原同其它寄生虫病的交叉反应较小,可用于尖吻蝮蛇舌形虫病的血清学检测,而其有效的诊断抗原成分需经纯化后再行进一步的分析.
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基因重组抗原在旋毛虫病免疫诊断及免疫预防方面的研究
旋毛虫病是一种严重的人兽共患寄生虫病.若不及时诊断和治疗,患者死亡率可高达3%～30%,但本病目前尚无满意的诊断和预防方法.由于目前用于旋毛虫病免疫诊断的抗原多为虫体粗抗原,因其抗原成份复杂,常和其它寄生虫病发生交叉反应而出现假阳性;旋毛虫不能在体外完成完整的生活史,一般采用人工感染动物的方法获得虫体,然后制备抗原,这种经典方法大的弊端在于实验条件难以统一,制备抗原难以标准化,从而导致不同实验室、不同批次的抗原质量不同.
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日本血吸虫6种粗抗原和组分抗原的比较
目的比较日本血吸虫6种抗原(粗抗原及其组分抗原各3种)的敏感性和特异性.方法①用阳性钉螺逸出的尾蚴感染新西兰家兔,制作日本血吸虫病动物模型.②于感染后42天分别收集雌、雄成虫和虫卵,制作粗抗原及其组分抗原.③采用ELISA法检测抗原的敏感性和特异性,并以X2检验作统计学处理和分析.结果除雌虫组分抗原的敏感性(51%)较差外,都显示出日本血吸虫成虫及其虫卵组分抗原的较好敏感性和特异性.结论日本血吸虫组分抗原用于免疫诊断,具有较好的敏感性和特异性,但抗原分离、纯化方法有待进一步探讨.
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华支睾吸虫抗原纯化研究现况
随着华支睾吸虫防治工作的进展,其患病率及感染率逐步下降,而诊断的难度渐趋加大,原主要诊断方法--粪检固有的缺陷(工作量大,工作效率低,易漏检,群众不乐意接受)愈加突出,免疫诊断在临床辅助诊断和疫区流行病学调查中占据愈来愈重要的地位.诊断抗原的优劣决定着血清抗体检测、皮肤试验等免疫方法的诊断效果.目前所用的抗原主要为粗制成虫抗原,严重影响免疫诊断效果(1).因此,已有不少学者用不同方法对华支睾吸虫成虫粗抗原进行纯化研究.现按不同的研究方法综述如下.
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纯化抗原和粗抗原诊断包虫病的效果比较
目的比较纯化细粒棘球蚴囊液抗原和囊液粗抗原诊断包虫病的效果.方法用Burstein法纯化抗原,与粗抗原平行同步检测包虫病病人、健康人及其它寄生虫病病人血清,以标化阳性预告值(SPPV),标化阴性预告值(SNPV),标准化准确度(SAc)等计算综合积分指数(SII).结果两种抗原检测包虫病病人与健康人,其SII值:纯化抗原为96.0%,粗抗原为95.5%.包虫病与其他寄生虫病,其SII值:纯化抗原为94.9%,粗抗原为92.8%.结论表明Burstein法纯化抗原在诊断包虫病的质和量上均优于囊液粗抗原.
