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谷氨酰半胱氨酸连接酶催化亚基(GCLC)文献资料
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大鼠GCLC基因5'-上游调控区域(-876～+1)的3个E-box元件功能分析
目的:GCLC基因表达调控有助于在分子水平了解GSH变化的机制,对进一步探索机体抗氧化失衡的机制有重要意义.本实验主要研究GCLC基因上游调控区域(-876～+1)三个相邻E-box元件的作用及探讨E-box元件组合的基因转录作用机制.方法:利用PCR定点缺失法构建多种组合的缺失E-box元件的GCLC上游启动子序列的报告基因载体.将所构建的载体在脂质体介导下瞬时转染大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞(L2细胞),通过比较转染后细胞的荧光素酶活性,分析E-box元件对GCLC基因转录活性的影响.结果:成功构建出多组定点缺失E-box元件的GCLC-Luc基因.在大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞中转染缺失了E-box的GCLC-Luc组较转染GCLC-Luc组均有明显升高(P均＜0.05).结论:三个E-box元件(-804～-779,-729～-724,-590～-585)在GCLC基因的基础状态下的转录表达中都起到一定的抑制作用,可能以转录因子及元件复合物形式抑制GCLC基因的转录调控.此结果揭示GCLC基因上其他E-box元件之间也可能存在着相互作用方式,而非简单的单独作用.
