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一种单克隆抗体的电荷异质体分析
目的 对抗程序性死亡受体-1(programmed death-1,PD-1)单克隆抗体的电荷异质体进行结构鉴别及生物学功能分析.方法 通过检测抗PD-1单克隆抗体经专一性蛋白酶(唾液酸酶及羧肽酶)酶切前后的变化,初步确认电荷异质体的种类.采用阳离子交换色谱对电荷异质体进行分离和收集,经联用液相色谱-质谱(LC-MS)法分析电荷异质体各组分的组成;通过抑制抗原与配体相互作用影响NFAT荧光素酶报告基因表达的方法确定电荷异质体的生物学功能.结果 碱性异质体含量较少,主要变化为重链N-末端谷氨酰胺未环化;酸性异质体主要变化为重链N383脱氨化和糖链末端唾液酸化.各异质体的生物学活性为89％～102％.结论 抗PD-1单克隆抗体电荷异质体大部分修饰位点均远离互补决定区(complementary determining region,CDR),且在体外生物学活性方面差异较小.
关键词： 单克隆抗体 电荷异质体 离子交换色谱 联用液相色谱-质谱法 生物学活性 -
阿达木单抗理化特性的关键质量属性分析
阿达木单抗是作用于肿瘤坏死因子α(TNF-α)的全人源单克隆抗体药物,由1 330个氨基酸组成,相对分子质量约1.48×105.本研究通过分子排阻色谱(SEC-HPLC)、还原和非还原毛细管电泳(CE-SDS)测定了7批阿达木单抗注射液的高分子量物质(HMWS)、单体及低分子量物质(LMWS);采用毛细管电泳法和UPLC-Q-TOF MS法分析其N-糖;应用阴离子色谱法和UPLC法测定其唾液酸化水平;采用成像毛细管等电聚焦电泳和阳离子交换色谱法分析了其中的电荷异质体.为进一步研究电荷异质体来源,采用UPLC-Q-TOF MS肽图法分析阿达木单抗发生的翻译后修饰.单抗药物作为大分子生物药物,分子结构复杂,很难用单一方法进行质量分析和控制.本试验利用不同的质量分析方法,从HMWS、LMWS、N-糖基化、唾液酸、电荷异质体5个方面有针对性地检测了阿达木单抗注射液的关键质量属性,可为阿达木单抗及其制剂的质量控制提供参考.
