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应用3种品系小鼠评价新型抗胃泌素疫苗体液免疫原性
目的 应用3种品系小鼠评价新型抗胃泌素疫苗的体液免疫原性,为该疫苗生物活性检测方法的建立提供参考.方法 将疫苗(500 μg/mL)肌肉注射免疫3种不同品系(BALB/c、NIH、C57BL/6)小鼠,0.1 mL/只,阴性对照给予等体积疫苗佐剂,每2周免疫1次,共免疫3次,分别于首次免疫后第2、4、6、8周经眼眶采血,分离血清,ELISA法检测血清特异性抗胃泌素IgG抗体滴度.结果 首次免疫后第2周,50％ NIH小鼠血清可检测到抗体滴度,第4、6周,100％ NIH小鼠血清可检测到抗体滴度,第8周67％ NIH小鼠血清可检测到抗体滴度,第6、8周与其第4周抗体滴度差异无统计学意义(P＞0.05);第4、6、8周,100％ BALB/c和C57BL/6小鼠血清均可检测到抗体滴度,第6、8周分别与其第4周抗体滴度相比,差异均无统计学意义(P＞0.05).首次免疫后第4周,NIH小鼠血清抗体滴度均显著高于BALB/c和C57BL/6小鼠(P＜0.05),分别较其高356％和465％;首次免疫后第6周,NIH小鼠血清抗体滴度均显著高于BALB/c和C57BL/6小鼠(P＜0.05),分别较其高506％和413％.结论 NIH小鼠对该疫苗的体液免疫反应活性较BALB/c、C57BL/6小鼠更敏感,可用NIH小鼠评价该疫苗的体液免疫原性.
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SFTSV糖蛋白Gn重组质粒的构建及其体液免疫原性研究
目的:研究严重发热伴血小板减少综合征病毒(severe fever with thrombocytopenia syndrome virus,SFTSV)糖蛋白Gn的体液免疫原性.方法:将PCR方法扩增的SFTSV糖蛋白Gn基因和密码子优化后Gn基因克隆入载体pJW4303,构建Gn野生型和双优化重组质粒;经酶切和测序鉴定确认为目的质粒后,分别转染HEK293T细胞,Western blot检测糖蛋白Gn的表达;用Gn重组表达质粒及空载体分别免疫BALB/c小鼠,ELISA检测免疫后小鼠血清抗Gn特异性IgG抗体.结果:成功构建Gn重组野生型质粒pJW4303-WSP-Gn和双优化质粒pJW4303-tPA-Gn-opt;Western blot证实pJW4303-WSP-Gn编码Gn可在HEK293T细胞内表达,pJW4303-tPA-Gn-opt编码Gn在HEK293T细胞内表达并分泌到细胞外;ELISA检测免疫后小鼠血清抗Gn特异性IgG抗体证实各重组质粒均能诱导特异性IgG抗体产生,双优化质粒较野生型质粒诱导产生的IgG时间更早、滴度更高.结论:SFTSV的糖蛋白Gn具有良好的免疫原性;和野生型质粒相比,双优化质粒更有利于糖蛋白Gn的表达和分泌,并且具有更好的体液免疫原性.
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新型抗胃泌素17疫苗的体液免疫原性与抗原性研究
目的:研究一种新型胃泌素17抗原表位结合破伤风类毒素蛋白载体疫苗的体液免疫原性与抗原性,为该疫苗的免疫学药效作用提供参考.方法:疫苗以方案(0.5 mg·只-1×免疫1次·2周-1×免疫3次,i.m)对新西兰大白兔(雌性,n=6)进行免疫,以酶联免疫吸附实验(ELISA)检测免疫开始后第4、6、8周动物血清内IgG抗体滴度;以竞争性ELISA法检测各类人源蛋白[酰胺化胃泌素17(amidated-G17)、甘氨酸延伸型胃泌素17(gly-G17)、酰胺化胃泌素34(amidated-G34)、血管活性肠肽(VIP)]对疫苗抗体结合抗原的抑制率.结果:免疫开始后第4周所有动物体内均可检测到抗体滴度,第6周抗体滴度达到大值(P＜0.05 vs第4周),第8周抗体滴度恢复至第4周水平(P＞0.05 vs 第4周);随上述蛋白浓度升高(10-4、10-3、10-2、10-1、100、101、102 μmol·L-1),amidated-G17、gly-G17对抗体结合抗原的抑制率均显著升高,其抑制率分别为11.1％、14.8％、20％、26.5％、45％、74.5％、80.8％,11.6％、15.8％、19.1％、25.3％、45.3％、73％、78.2％;而amidated-G34、VIP对抗体结合抗原的抑制率均接近0％.结论:该新型抗胃泌素17疫苗(G17-TT)具有较好的体液免疫原性与抗原性.
