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随机组合多表位恶性疟疾疫苗M.RCAg-1蛋白的纯化及鉴定
目的 纯化随机组合多表位恶性疟疾疫苗M.RCAg-1蛋白,并进行各项鉴定.方法 对BL21 (DE3)-M.RCAg-1/pDS-ex工程菌发酵产物进行纯化,对纯化的M.RCAg-1蛋白进行各种理化性质鉴定；采用Western blot法检测其反应原性；以不同剂量的M.RCAg-1蛋白免疫BALB/c小鼠及新西兰大白兔,采用间接ELISA法检测小鼠血清抗体效价；间接荧光免疫法(IFA)分析免疫血清对天然疟原虫抗原的识别；酶联免疫斑点试验检测特异性鼠T淋巴细胞的活化及细胞因子的分泌；体外生长抑制试验检测免疫兔血清对恶性疟原虫生长的影响.结果 M.RCAg-1蛋白表达量约为菌体总蛋白的30％,浓度为1.5 mg/ml,纯度可达95％左右,等电点为5.0；内毒素残留量均小于2.5 EU/mg,宿主蛋白残留量为0.08％,N-末端氨基酸序列正确；可与相应鼠单抗特异性结合；免疫小鼠血清抗体水平随着免疫次数和免疫剂量的增加而升高,20及30 μg剂量组在末次免疫后,血清抗体滴度均可达1:1 031 707;各免疫组小鼠血清均能识别恶性疟原虫天然抗原,且呈抗原剂量依赖性；10、20和30 μg剂量组能刺激相应特异性脾淋巴细胞显著增殖(P＜0.01)及分泌IFNγ和IL-4(P＜0.01),并能较好地抑制疟原虫体外生长.结论 纯化的M.RCAg-1蛋白理化性质稳定,具有较强的免疫原性,能激发可持续、高滴度的特异性抗体,并能诱发显著的T细胞应答,是极具潜力的候选疫苗蛋白,具有较好的开发前景.
关键词： M.RCAg-1蛋白 多表位蛋白 疟疾疫苗 -
阿仑膦酸钠作为口服佐剂对恶性疟原虫多表位嵌合抗原M.RCAg-1免疫原性的影响
目的 评价口服阿仑膦酸钠(alendronate,ALD)对恶性疟原虫多表位嵌合抗原M.RCAg-1免疫原性的影响.方法 分别用不同剂量的ALD(0.05、0.1、1 mg)和M.RCAg-1配伍后免疫BALB/c小鼠,M.RCAg-1蛋白经背部皮下注射免疫,20 μg/只,同时经灌胃给药ALD,共免疫3次,每次间隔14 d,于末次免疫后10 d经小鼠尾静脉采血,分离血清.ELISA法测定小鼠血清中抗M.RCAg-1蛋白的抗体滴度、IgG抗体分型及血清抗体对M.RCAg-1单表位的识别滴度;间接免疫荧光反应(IFA)检测小鼠血清抗体对恶性疟原虫天然蛋白的识别滴度;ELISPOT法检测小鼠脾淋巴细胞免疫水平.结果 0.05 mg ALD+ M.RCAg-1及0.1 mg ALD+ M.RCAg-1组小鼠血清中抗M.RCAg-1的抗体水平均可达1∶108;IgG抗体主要以IgG1为主;对M.RCAg-1的11个单个抗原表位(E1～E11)可全部识别;由各表位抗原(除E2外)诱导分泌IL-4的特异性淋巴细胞克隆数明显高于分泌IFNγ的特异性淋巴细胞克隆数(P＜0.0001).0.1 mg ALD+M.RCAg-1组小鼠血清抗体对恶性疟原虫天然蛋白的识别滴度明显高于0.05 mg ALD+M.RCAg-1组(P＜0.000 1).结论 ALD作为恶性疟原虫多表位嵌合抗原M.RCAg-1的佐剂可显著提高其体液免疫及细胞免疫水平.
关键词： 阿仑膦酸钠 恶性疟原虫 M.RCAg-1蛋白 免疫原性
