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碱性纤维素酶文献资料
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碱性纤维素酶基因在巴氏毕赤酵母中的表达及重组酵母菌发酵工艺的优化
目的 克隆碱性纤维素酶基因,构建酵母整合型表达质粒,在巴氏毕赤酵母中表达,并对重组菌的发酵工艺进行优化.方法 应用PCR技术从嗜碱性芽孢杆菌ATCC21833中扩增碱性纤维素酶基因,克隆至酵母整合型表达载体pGAPZαA中,构建重组表达质粒pGAPZαA-ATCC21833,并转化至巴氏毕赤酵母GS115.通过单因素实验及正交实验,确定重组酵母的佳发酵培养基.在20 L发酵罐中进行高密度发酵,观察碳源对批式发酵的影响,并检测在4种流加方式(连续恒速流加、间歇匀速流加、间歇递减流加、维持底物浓度流加)下的菌体干重及发酵液中的酶活性.结果 重组表达质粒pGAPZαA-ATCC21833经酶切及DNA测序证明构建正确,其基因序列与嗜碱性芽孢杆菌KSM-635的碱性纤维素酶基因序列一致.佳发酵培养基组成为6%葡萄糖、2%硫酸铵、12 g/L磷酸二氢钾.碳源浓度对于重组酵母菌体生长及产酶至关重要.SDS-PAGE表明表达产物的相对分子质量约为103 000.维持底物浓度的流加方式可获得高的菌体干重(29.8 g/L)及酶活力(24 U/ml).结论 已成功构建了表达碱性纤维素酶的巴氏毕赤酵母工程菌,并确定了维持底物浓度的流加方式为佳发酵方式.
