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鸡传染性法氏囊病毒VP2基因的原核表达与抗原性分析
目的表达鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)弱毒株VP2蛋白并检测其抗原活性.方法以IBDV强毒致弱株Gt株基因组RNA为模板,应用RT-PCR方法扩增VP2基因,并将其克隆入pUC18载体,经PCR、酶切及测序鉴定正确后,将其亚克隆到原核表达载体pET30a中,并经酶切、PCR、测序鉴定,阳性重组表达质粒转化E. coli BL21(DE3)菌,经IPTG诱导后,表达产物用SDS-PAGE及Western blot检测.结果阳性重组表达质粒转化E. coli BL21(DE3)后,经诱导表达了目的蛋白,表达量占菌体总蛋白的15%.Western blot检测表达蛋白可与IBDV阳性血清发生反应,而与阴性对照血清不发生反应.结论已成功表达了鸡传染性法氏囊病毒弱毒株VP2蛋白,且具有良好的抗原性.
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鸡传染性法氏囊病基因工程疫苗研究进展
传染性法氏囊病毒感染主要采用疫苗进行预防.近年来由于变异毒株不断出现,给疫病预防带来困难,因此:人们积极投向基因工程疫苗的研究.本文综述了基因工程疫苗的研究进展.
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鸡干扰素γ的原核表达及其抗传染性法氏囊病毒的活性分析
目的 原核表达鸡干扰素γ(chicken interferon γ,ChIFNγ),并对其抗传染性法氏囊病毒(infectious bursal disease virus,IBDV)活性进行检测.方法 PCR法扩增ChIFNγ基因,克隆至载体pET-28a中,转化感受态E.coliBL21,经IPTG诱导表达,His-binding-resin柱进行纯化.取200 ng纯化蛋白,加至鸡胚成纤维细胞,37℃孵育24 h,接种IBDV,攻毒48 h观察细胞病变情况.将纯化蛋白经腹腔注射14日龄雏鸡,200 μg/只,24 h后再注射1次,48 h后用IBDV进行感染,103 TCID5o/只,感染48 h后无菌取鸡法氏囊组织,进行病理学及qRT-PCR检测.结果 纯化蛋白相对分子质量约18 000,可与抗His标签单克隆抗体发生特异性结合,浓度约0.8 mg/mL.加入纯化蛋白的鸡成纤维细胞病变明显减轻;注射纯化蛋白雏鸡的法氏囊组织病变减轻,病毒载量明显降低(P＜0.001).结论 本实验成功表达了ChIFNγ重组蛋白,且于体内、外均有抑制IBDV的作用,为该蛋白的应用提供了实验依据.
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染性法氏囊病病毒分离株变异的研究
为了了解我国传染性法氏囊病病毒(IBDV)的变异现状,并为研究高效疫苗打下基础,用琼脂糖凝胶电泳,SDS-PAGE和序列分析等分子生物学方法，分析IBDV病毒RNA，结构蛋白的变异情况。结果表明:⑴3种不同源IBDV均由双节段RNA组成，大小基因片段的电泳迁移率各病毒间无差异；⑵不同源IBDV的结构蛋白带谱相同，但各蛋白带的百分含量有差异；⑶IBDV血清Ⅰ型不同亚型的JS3和JS4毒株主要保护性抗原VP2高变区核酸序列的同源性高达98%，与已发表的vvIBDV，IBDV变异株， IBDV经典株及IBDV弱毒株核苷酸序列同源性在 92 %～98%之间。根据IBDV的大开放读框推导出该片段编码蛋白的氨基酸序列，JS3和JS4的同源性高达97%，与上述其它毒株的同源性在91%～97%之间；七肽区的氨基酸序列，在强毒株完全相同，而在弱毒株有一个丝氨酸突变成其它氨基酸。
