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探讨NR2B受体参与拮抗水杨酸钠引起离体培养螺旋神经节细胞Caspase-3mRNA上调的实验研究
目的：探讨NR2B受体参与拮抗水杨酸钠引起离体培养螺旋神经节细胞Caspase-3mRNA上调的作用。方法：将培养的耳蜗螺旋神经节细胞随机分为3组，分别为谷氨酸组：培养液中仅加入1mm谷氨酸，水杨酸钠组：培养液中加入1mm谷氨酸和5mm水杨酸钠，艾芬地尔组：培养液中加入10μm艾芬地尔、1mm谷氨酸和5mm水杨酸钠。上述三组细胞需培养24h后，再加药物干预3h。收集细胞并采用实时荧光定量PCR技术检测Caspase-3mRNA的转录情况，以研究应用艾芬地尔特异性阻断NR2B受体对水杨酸钠引起离体培养螺旋神经节细胞Caspase-3基因上调过程的影响情况。结果：艾芬地尔组螺旋神经节细胞中的Caspase-3 mRNA转录水平显著高于谷氨酸组螺旋神经节细胞和水杨酸钠组螺旋神经节细胞（P值均＜0.01），而水杨酸钠组螺旋神经节细胞中的Caspase-3mRNA转录水平又显著高于较谷氨酸组螺旋神经节细胞(P<0.01)。结论：NR2B受体能够拮抗水杨酸钠引起的离体培养螺旋神经节细胞Caspase-3mRNA的上调。
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艾芬地尔对异氟烷所致发育期海马神经元毒性的保护作用
目的:通过体外实验探讨艾芬地尔对异氟烷所致发育期海马神经元毒性的保护作用.方法:从出生一天的大鼠海马获取神经元并体外培养5天.这些神经元被随机分入4组,包括对照组(control组)、异氟醚组(Iso组)、艾芬地尔(Ifen组)和艾芬地尔+异氟烷组(Ifen+ ISO组).使用MTT法检测细胞活力及细胞损伤程度.使用TUNEL染色法检测细胞凋亡.使用Western blot法检测神经元中NMDA受体亚基NR2B和活化caspase-3的表达水平.结果:与对照组比较,在2.4％异氟烷暴露后1小时神经元的细胞活力显著下降(P＜0.05).同时,在2.4％异氟烷暴露后神经元的凋亡指数也显著升高(P＜0.05).Western blot结果显示,异氟烷暴露可显著升高神经元活化caspase-3和NR2B的表达水平(P＜0.05).然而,使用NR2B拮抗剂艾芬地尔(20 μM)不仅可显著减少异氟烷所致的NR2B表达水平增高,也可缓解异氟烷造成的神经元凋亡和细胞损伤(P＜0.01).结论:异氟烷可导致发育期神经元NR2B表达水平增高,而使用NR2B受体拮抗剂艾芬地尔可有效抑制NR2B的表达水平从而减少异氟烷所致神经元毒性.
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艾芬地尔对大鼠心肺复苏后脑组织含水量和水通道蛋白-4表达的影响
目的 探讨艾芬地尔(NMDA)对大鼠脑组织含水量和水通道蛋白-4(AQP4)表达的影响.方法 78只雄性sD大鼠随机分为三组:对照组、复苏组及NMDA治疗组.每组再分为三个亚组,即自主循环恢复(ROSC)后1、3、6 h组,除对照组各时问点为6只大鼠外,另两组大鼠各时间点均为10只.NMDA治疗组在复苏后立即行NMDA干预.应用免疫组化测定脑组织AQP4表达,干湿质量法测定脑组织含水量(BWC).结果 NMDA治疗组ROSC后1、3和6 h BWC和AQP4表达水平与相同时点复苏组比较均明显降低(P＜0.05).另外,复苏和NMDA治疗组BWC和AQP4两者的变化呈正相关,相关系数分别为0.58和0.48.结论 艾芬地尔可减轻心肺复苏后脑水肿,其机制可能是艾芬地尔降低了AQP4的表达.
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艾芬地尔对异氟醚麻醉后学习记忆损害的影响
目的 探讨侧脑室给予N-甲基-D-天冬氨酸2B(N-methyl-D-aspartate receptor subunit 2B, NR2B)受体拮抗剂艾芬地尔对长时程异氟醚麻醉后小鼠学习记忆损害的影响. 方法 雄性C57BL/6小鼠80只,8周龄,按随机数字表法分为5组(每组16只):空白对照组(C组),吸入O2维持6 h;假手术组(S组),侧脑室注射生理盐水2 μl后吸入O2维持6 h;异氟醚组(A组),侧脑室注射生理盐水2 μl后吸入1.3%的异氟醚维持6 h;异氟醚+艾芬地尔组(AI组),侧脑室注射艾芬地尔(2 μg)2 μl后吸入1.3%的异氟醚维持6 h;艾芬地尔组(I组),侧脑室注射艾芬地尔(2 μg)2 μl后吸入O2维持6 h.用新物体识别实验(novel object recognition, NOR)和场景恐惧实验(fear conditioning, FC)检测麻醉后第3、7天小鼠的学习记忆.用实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real time polymerase chain reaction, q-PCR)检测海马NR2B mRNA表达情况. 结果 在NOR中,麻醉后第3天和第7天,与S组比较,A组辨别指数下降(P＜0.05);与A组比较,AI组辨别指数升高(P＜0.05).在FC中,麻醉后第3天和第7天,与S组比较,A组凝滞时间百分数减少(P＜0.05);与A组比较,AI组凝滞时间百分数增加(P＜0.05). q-PCR结果显示,麻醉后即刻,与S组比较,A组海马NR2B mRNA表达升高(P＜0.05);麻醉后第3天和第7天,与S组比较,A组海马NR2B mRNA表达降低(P＜0.05);与A组比较,AI组海马NR2B mRNA表达升高(P＜0.05);麻醉后即刻、第3天和第7天,与S组比较, I组海马NR2B mRNA表达降低,但差异无统计学意义(P>0.05). 结论 侧脑室预给予艾芬地尔可减轻长时程异氟醚麻醉后小鼠学习记忆损害,其机制可能与海马NR2B表达改变有关.
关键词： 异氟醚 学习记忆损害 艾芬地尔 N-甲基-D-天冬氨酸2B受体 -
艾芬地尔治疗骨癌痛的实验研究
目的 观察N-甲基-D-天门冬氨酸 (NMDA)受体2B亚型选择性拮抗剂艾芬地尔对大鼠胫骨癌痛的治疗作用.方法 采用Walker256乳腺癌细胞建立雌性Wistar大鼠胫骨癌痛模型.于第15天将模型大鼠随机分为10组,每组6只:生理盐水组、吗啡(5、10、20 mg)组、艾芬地尔(2.5、5、10 mg)组和MK-801(0.1、0.25、0.5 mg)组.腹腔注射后,观察各种药物及不同剂量对大鼠自发疼痛和机械超敏反应的影响.结果 艾芬地尔对胫骨癌痛大鼠的自发疼痛和机械超敏反应呈剂量依赖性的抑制作用,作用与吗啡相似;而MK-801仅在较大剂量产生明显的镇痛作用.结论 全身给予NMDA受体2B亚型选择性拮抗剂艾芬地尔有明显的镇痛作用.
关键词： 疼痛 N-甲基-D-天门冬氨酸 艾芬地尔 -
蛛网膜下腔注入艾芬地尔对大鼠炎症痛阈的影响
目的研究N-甲基-D天门冬氨酸(NMDA)2B亚型受体特异性拮抗剂艾芬地尔对大鼠炎症两个时相痛阈的影响.方法分别对大鼠进行蛛网膜下腔置管,1周后,取无活动和感觉障碍大鼠随机分为4组,为正常对照(N)组、模型(M)组、氯胺酮(K)组、艾芬地尔(I)组.N组大鼠右侧后脚掌注入生理盐水100μl,其它各组分别右侧后脚掌注入相同容量2%角叉菜胶(carrageenan)致炎.各组在致炎后3 h,蛛网膜下腔注射相应容量药物,N组和M组大鼠分别注入生理盐水,致炎后3、15h观察其机械痛阈值和热辐射潜伏期.结果M组两个时相上痛阈值明显降低;氯胺酮在早期时相镇痛作用较弱,而在第二时相上镇痛作用较强(P＜0.05);艾芬地尔在两个时相都能够产生较强镇痛作用(P＜0.05);这两种药物都有提高正常大鼠痛阈值作用(P＜0.05).结论氯胺酮、艾芬地尔都有镇痛作用,但是其起效时间及作用机制可能不同.对炎症性疼痛,蛛网膜下腔用ifenprodil可以有比氯胺酮更好的镇痛效果.
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艾芬地尔预处理对七氟醚致幼年大鼠学习记忆能力损伤的保护作用及机制
目的：探讨N-甲基-D-天冬氨酸受体亚型（ NR2B受体）拮抗剂艾芬地尔对七氟醚导致的幼年大鼠学习记忆能力损伤的保护作用及机制。方法出生后7 d的雄性SD大鼠随机分为四组：对照组（ Con组）给予腹腔注射双蒸水10 mg／kg后暴露在30％氧气下4 h；艾芬地尔组（Ifen组）给予腹腔注射艾芬地尔（10 mg／kg）后暴露在30％氧气下4 h；七氟醚组（ Sev组）腹腔注射双蒸水后暴露在2％七氟醚4 h；七氟醚＋艾芬地尔组（ Sev＋Ifen组）给予腹腔注射艾芬地尔后暴露在2％七氟醚下4 h。用Western blotting、免疫荧光法检测大鼠海马区NR2B及凋亡相关蛋白半胱氨酸蛋白酶3（Caspase-3）、聚腺苷二磷酸核糖聚合酶（PARP）的表达。大鼠于出生后40 d行Morris 水迷宫和避暗实验评估其学习记忆能力。结果与Con组及Sev＋Ifen组比较，Sev、Ifen组NR2B、Caspase-3、PARP、Caspase-3阳性细胞百分比均升高（P＜0．05或＜0．01），Con组及Sev＋Ifen组比较，P均＞0．05。在定位航行实验中，Sev组的潜伏期于第2、3天长于Con组（P均＜0．05）。空间探索实验中，各组目标象限的时间百分比比较差异无统计学意义（P均＞0．05）。避暗实验结果表明，与Con组比较，Ifen、Sev组记忆潜伏期缩短（P均＜0．05），Sev＋Ifen组差异无统计学意义（P＞0．05）。结论预先给予艾芬地尔可减少七氟醚对幼鼠学习记忆能力的损伤，其机制可能与抑制NR2 B表达及其所诱导的细胞凋亡有关。
关键词： 记忆能力损伤 七氟醚 艾芬地尔 N-甲基-D-天冬氨酸受体 幼鼠 -
艾芬地尔重复鞘内注射对骨癌痛模型小鼠痛行为的影响
目的 观察艾芬地尔重复鞘内注射对小鼠骨癌痛的影响.方法 96只雄性C3H/HeJ小鼠随机分为肿瘤给药组(T组)、肿瘤对照组(C组)和假手术组(S组).将含2 ×105个纤维肉瘤NCTC2472细胞的小必需培养基(α-MEM)注射到小鼠右侧股骨远端骨髓腔内,制作骨癌痛模型.假手术组注入不含肿瘤细胞的α-MEM.T组在术后第14天开始,鞘内注射艾芬地尔5μl(10μg),每天1次,连续3天.C组和S组在相同时间点分别给予相同体积的溶媒.各组于接种前l天,接种后第3天、第5天、第7天、第10天、第14天、第17天、第19天和第23天检测痛行为学指标,包括小鼠的自发抬足次数、机械性缩足反射阈值(PWMT)和热缩足反射潜伏期(PWTL).按照分组在相应时间点处死小鼠,用Western-blotting方法检测脊髓腰膨大NR2B蛋白表达水平.结果 肿瘤细胞接种后第14天,和S组及术前基础值相比,T组小鼠自发性抬足[ (12.88 ±1.64)次]显著增加,PWMT(0.39 ±0.17)g和PWTL( 11.59±1.67)s明显下降(P＜0.05).脊髓NR2B蛋白(2.12 ±0.13)显著增加(P＜0.05).肿瘤细胞接种后第17天,第19天,第23天,和第14天及C组相比,T组自发性抬足[(5.13±1.38)次,(4.70±1.58)次,(5.64±1.17)次]明显减少,PWMT[ (1.10 ±0.65)g,(0.95 ±0.56) g,(1.05 ±0.26)g]和PWTL[ (15.17±1.27)s,(15.93 ±2.18)s,(16.28±1.48)s]显著增加(P＜0.05).脊髓NR2B蛋白[(1.42±0.17),(1.67±0.53),(1.14±0.79)]显著减少(P＜0.05).结论 重复鞘内注射艾芬地尔能显著改善骨癌痛小鼠的痛行为,降低脊髓NR2B蛋白.
关键词： 艾芬地尔 N-甲荃-D-天冬氨酸受体 骨癌痛 小鼠 -
艾芬地尔鞘内注射对骨癌痛模型小鼠痛行为的改善作用
目的 在小鼠骨癌痛模型上观察鞘内注射N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基(NR2B)拮抗剂艾芬地尔的镇痛效果.方法 将含2×105个纤维肉瘤细胞NCTC 2472的小必需培养基(α-MEM)注射到C3H/HeJ小鼠右侧股骨远端骨髓腔,制作骨癌痛模型(T组).同时设假手术组(S组,n =10),注入不含肿瘤细胞的α-MEM.所有小鼠均于接种前1 d,接种后第3,5,7,10,14天检测痛行为学指标,包括自发性抬足次数、机械痛缩足阈值(PWMT)和热痛缩足潜伏期(PWTL).骨癌痛模型制作成功的T组小鼠在接种后第14天,进一步分为艾芬地尔 2.5 μg、5.0 μg、10.0 μg组(I1、I2、I3 组,n =10)和对照组(C组,n =10),I1～I3组鞘内注射相应剂量的艾芬地尔,C组及S组给予溶媒,注药体积均为5.0 μl,鞘内注射后2 h、12 h、24 h再进行行为学检测.结果 与S组[(2.44±0.79)次]和术前基础值[(2.20±0.85)次]相比,肿瘤细胞接种后第14天T组小鼠自发性抬足[(13.16±1.78)次]显著增多( P ＜0.05),PWMT[(0.47±0.19)g]较S组[(1.70±0.31)g]和基础值[(1.83±0.23)g]降低( P ＜0.05),PWTL[(10.01±1.42)s]较S组[(17.62±1.07)s]和基础值[(18.32±1.57)s]缩短( P ＜0.05);给药后2 h、12 h,与C组及14 d 给药前比较,I2和I3组自发性抬足次数减少( P ＜0.05),PWMT增高( P ＜0.05),PWTL延长( P ＜0.05),且I3组比I2组对痛行为学的改善更显著( P ＜0.05);I1组给药后痛行为学无明显变化( P ＞0.05).结论 鞘内注射艾芬地尔有效改善骨癌痛小鼠的痛行为学反应.
关键词： 艾芬地尔 N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基 骨癌痛 脊髓 -
艾芬地尔对脑缺血再灌注大鼠Musashi1表达的影响
目的 探讨艾芬地尔对脑缺血再灌注不同时相大鼠脑组织的保护作用及对Musashi1表达的影响.方法 将84只Wistar大鼠随机分为3组,假手术组、脑缺血再灌注组(模型组)、艾芬地尔组(干预组)各28只,采用线拴栓塞法建立大脑中动脉闭塞模型,分别于再灌注2、3、7、14 d各处死7只大鼠,其中1只用于透射电镜观察神经细胞超微结构变化,6只用于尼氏染色观察神经细胞组织学变化,免疫组化研究Musashi1的表达规律.结果 (1)与假手术组比较,模型组有以下表现,电镜:神经元胞体及细胞器肿胀明显,胞浆密度降低;尼氏染色:神经元数目减少,胞体肿胀,尼氏小体减少或消失;免疫组化:Musashi1阳性细胞在再灌注2 d时即出现轻微增多,3 d时表达急剧上升,持续至14 d仍有较高表达;(2)与模型组比较,干预组表现特点如下,电镜:神经元胞体及细胞器轻度肿胀;尼氏染色:尼氏小体较多;免疫组化:Musashi1阳性细胞较相同时点模型组表达增多,光密度值增高,表达规律同模型组.结论 艾芬地尔能够减轻脑缺血再灌注造成的细胞损伤,具有促进神经再生因子Musashi1表达的作用,对于改善脑缺血再灌注损伤具有积极作用.
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艾芬地尔对脑缺血再灌注大鼠AIF表达及神经元凋亡的影响
目的 探讨艾芬地尔(ifenprodil)对大鼠脑缺血再灌注后凋亡诱导因子(apoptosis inducing factor,AIF)表达及神经元凋亡的影响.方法 线栓法建立Wistar大鼠大脑中动脉闭塞(MACO)模型,采用原位末端标记法(TUNEL)及免疫组化法分别于6、24、48、72和168 h观察假手术组、对照组及艾芬地尔(10 mg/kg,ip)组缺血半暗带区神经元凋亡数及AIF阳性细胞数的变化.结果 艾芬地尔组大鼠脑组织凋亡细胞数及AIF阳性细胞数均低于对照组(P<0.05).结论 艾芬地尔具有抗凋亡作用,其机理可能系通过阻滞变化[N-甲基-D-天冬氨酸盐(N-Methyl-D-aspartate,NMDA)]受体NR2B亚基,降低兴奋性氨基酸毒性,减少AIF的释放,来抑制AIF介导的细胞凋亡.
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耳蜗局部应用NR2B受体阻滞剂对水杨酸钠致豚鼠螺旋神经节细胞损伤的拮抗作用
目的：通过圆窗龛局部给予特异性N R2B受体阻滞剂艾芬地尔，探讨其拮抗水杨酸钠致豚鼠螺旋神经节细胞损伤的作用。方法将ABR阈值小于40 dB SPL的健康花色豚鼠48只随机分为4组，每组12只，Ⅰ组为空白对照组；Ⅱ组为人工外淋巴液（artificial perilymph ，APL）组，左耳圆窗龛注人 APL 60μl；Ⅲ组为水杨酸钠组，左耳圆窗龛注入A PL 60μl ，腹腔注射水杨酸钠；IV组为艾芬地尔组，左耳圆窗龛注入溶于 A PL的艾芬地尔（10μmol/L ）60μl后，腹腔注射水杨酸钠。水杨酸钠注射量为400 mg · kg -1· d-1，连续注射7天。停药并行ABR测试后将动物处死，取出左侧耳蜗，每组随机取6只动物进行免疫组织化学染色观察耳蜗螺旋神经节（SGN ） caspase-3表达情况，6只行原位末端转移酶标记技术（terminal deoxynucleotidyl transferase -mediated dUTP -biotin nick end labeling assay ，TUNEL）法检测螺旋神经节细胞凋亡率。结果给药后，I、II、III、IV 组动物左耳ABR反应阈分别为31．67±5．16、33．33±5．17、64．17±7．36、49．17±5．85 dB SPL ；免疫组织化学染色显示，Ⅰ、Ⅱ组螺旋神经节细胞中caspase-3的表达量差异无统计学意义，Ⅲ、IV组螺旋神经节细胞中caspase-3的表达量较Ⅰ、Ⅱ组显著增高（P＜0．01），IV组螺旋神经节细胞中caspase-3的表达量较Ⅲ组明显降低（P＜0．01）。TUNEL法检测结果示，Ⅰ、Ⅱ组SGN细胞凋亡率无显著差异，Ⅲ、IV组SGN细胞凋亡率较Ⅰ、Ⅱ组显著增高（P＜0．01）， IV组SGN细胞凋亡率较Ⅲ组明显降低（P＜0．01）。结论耳蜗局部特异性阻断NR2B受体可以拮抗水杨酸钠致豚鼠螺旋神经节细胞的损伤。
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NMDA受体与癫痫发病机制的研究现状
癫痫的主要机制为脑内兴奋性氨基酸活性升高.在癫痫发作中,N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)受体含量增多,表达升高,且其各个亚型之间相互作用,构形发生变化,使突触后膜支架蛋白磷酸化,发生级联发应,使NMDA受体配体离子通道持续开放,神经元持续放电,并向周尉神经元放散扩布;长期癫痫反复发作,导致苔藓纤维发芽,神经元缺失;这些形态学和电生理改变,反之,导致癫痫的易感和反复发作.通过多年动物实验和临床应用,提示N-甲基-D-冬氨酸受体亚单位2B(NR2B),高选择性的拮抗剂有广阔的临床应用前景.
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艾芬地尔干预后氯化锂-匹罗卡品致(癎)大鼠的慢性期脑电图特征
目的:了解艾芬地尔干预对氯化锂(LiCl)-匹罗卡品(Pilo)致(癎)大鼠脑电图随时间变化的特征.方法:通过腹腔注射LiCl-Pilo建立癫(癎)动物模型.60只雄性Wistar大鼠分为对照组、模型组和艾芬地尔干预组,分别在造模后第7、15、30、60天四个时间点观察各组大鼠行为、脑电图改变,每一个时间点5只大鼠.结果:对照组无NFDA1性发作,经过4-20天的潜伏期后,干预组及模型组的脑电图波幅及频率骤然减低,在慢性期干预组较模型组的波幅逐渐增高,频率逐渐增快,但仍未达发作当时的水平,且两组间比较差异无统计学意义.干预组较模型组更早更快趋于正常化.结论:艾芬地尔在LiCl-Pilo致(癎)大鼠模型中具有抗惊厥作用,慢性期脑电图有特征性改变.
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艾芬地尔对大鼠局灶性脑缺血损伤后脑水肿和AQP4表达的影响
目的:研究大鼠腩缺血后水通道蛋白4(AQP4)在脑内的表达及N-甲基-D-天冬氨基酸(NMDA)受体拮抗剂艾芬地尔对其的调节作用.方法:线栓法制作大脑中动脉阻塞(middle cerebral artery oechsion,MACO)局灶性脑缺血模型;干湿重法测量脑组织含水量以评估脑水肿的程度;免疫组化,免疫蛋白印记法测量AQP4(水通道蛋白4)的表达.结果:与假手术组比较,模型组和艾芬地尔组脑组织含水量、梗死灶周围AQP4表达明显增加;与模型组比较,艾芬地尔组能显著减少脑组织含水量,减轻梗死灶周围AQP4表达,差异有统计学意义.结论:缺血损伤后脑组织的AQP4表达上升,脑水肿明显,给予艾芬地尔后可抑制AQP4的表达,减轻脑水肿.
