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急性B淋巴细胞白血病B细胞淋巴瘤/白血病-2基因表达及其对预后意义研究
目的 探讨B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(bcl-2 )在儿童急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)的发生、发展及预后中的意义,分析反义寡核苷酸技术(ASODN)在儿童B-ALL的临床应用前景.方法 选取2006年10月至2010年10月青岛大学医学院附属医院儿科初诊B-ALL患儿36例,收集骨髓标本,获取骨髓单个核细胞(BMMCs),采用实时荧光定量PCR方法检测BMMCs中bcl-2 mRNA的表达;将bcl-2-ASODN用脂质体介导转染细胞后检测儿童B-ALL白血病细胞增殖和调亡改变;联合bcl-2-ASODN和VDLP(长春新碱、柔红霉素、门冬酰胺酶和地塞米松)化疗药物,四甲基偶氮唑盐法(MTT法)检测bcl-2-ASODN对儿童B-ALL白血病细胞体外化疗药物敏感性的影响.结果 (1)bc1-2 mRNA在B-ALL患儿中表达升高,与对照组比较差异有统计学意义(P < 0.05),化疗敏感组患儿治疗后bcl-2 mRNA表达明显减低,较化疗耐药组差异有统计学意义(P < 0.05);(2)bcl-2-ASODN用脂质体介导转染后白血病细胞增殖减弱、凋亡增加,较对照组差异有统计学意义(P<0.05);(3)体外联合bcl-2-ASODN和VDLP化疗药物能够显著抑制儿童B-ALL白血病细胞增殖,增加儿童B-ALL白血病细胞对化疗药物敏感性(P < 0.05).结论 bc1-2在儿童B-ALL的发病机制中扮演重要角色;内源性bcl-2可能是儿童B-ALL细胞化疗耐药的重要原因之一,而bcl-2-ASODN能够增加儿童B-ALL细胞体外对化疗药物的敏感性.
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转化生长因子-β1反义寡核苷酸对人横纹肌肉瘤细胞RD增殖的影响
目的 研究转化生长因子(TGF)-β1反义寡核苷酸(ASON)对人胚胎性横纹肌肉瘤细胞系RD增殖的影响.方法 采用反义寡核苷酸技术,以阳离子脂质体为载体,将人工合成的TGF-β1 ASON转染RD细胞,阻碍内源性TGF-β1/Smad信号的转导,以未转染的RD细胞组作对照.免疫荧光技术检测RD细胞TGF-β1蛋白表达水平;四甲基偶氮唑盐实验(MTT)检测RD细胞的增殖情况;流式细胞术(FCM)检测细胞周期.结果 转染4 d后RD细胞TGF-β1蛋白表达量较转入2 d时明显减少,与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05);RD细胞活力明显降低,合成期(S期)细胞减少.结论 TGF-β1 ASON可有效阻碍TGF-β1/Smad信号通路,在一定程度上可促进RD细胞退出细胞周期,并抑制RD细胞增殖.
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FasL反义寡核苷酸对舌鳞癌细胞Tca8113增殖和凋亡的影响
目的 探讨Fas配体(FasL)反义寡核苷酸(ASO)对舌鳞癌细胞系Tca8113细胞增殖和凋亡的影响.方法 设计合成特异性的FasL ASO,并用阳离子脂质体介导转染Tca8113细胞.荧光倒置显微镜观察及流式细胞术(FCM)检测转然前后的转染效率,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测不同浓度ASO在转染后不同时间对Tca8113 细胞增殖的影响;FCM测定转染前后诱导 Tca8113细胞的凋亡情况.结果 通过荧光倒置显微镜观察及FCM检测发现在脂质体的量一定的情况下,在一定范围内,ASO 的浓度越高,转染效率越高.MTT 结果显示ASO 对Tca8113细胞的增殖有明显抑制作用(P<0.05),FCM对细胞凋亡的检测结果显示反义链组与正义链组、空白对照组及脂质体组相比,总凋亡率有明显差异(P<0.05).结论 FasL ASO对Tca8113细胞的增殖有一定的抑制作用,能够促进其凋亡,因此FasL ASO有望成为舌鳞癌的潜在的基因治疗方法.
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反义NF-κBp65寡核苷酸对食管鳞癌细胞EC9706增殖及凋亡的影响
目的:探讨反义NF-κB p65寡核苷酸对食管鳞癌细胞EC9706增殖、凋亡及细胞周期的影响.方法:利用转染试剂KeyGenl介导将反义NF-κB p65寡核苷酸片段体外转染人人食管鳞癌EC9706细胞株.转染72 h后.应用RT-PCR、流式细胞术检测EC9706细胞中NF-κB p65 mRNA和蛋白的表达;MTT法检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡和细胞增殖周期.以单纯转染试剂为阴性对照,未转染的EC9706细胞为空白对照.结果:转染72 h后,反义组EC9706细胞中NF-κB p65 mRNA的表达及蛋白标记率与阴性对照和空白对照组比较,下降明显.差异具有统计学意义(P<0.05);反义组EC9706细胞的增殖能力与阴性对照和空白对照组相比明显受抑,抑制率为15.0%;反义组EC9706凋亡细胞数较阴性对照、空白对照组升高,差异具有统计学意义(P<0.05);反义组G.期的EC9706细胞数较阴性对照、空白对照组升高,而S期细胞数较阴性对照、空白对照组降低,差异均具有统计学意义(P均<0.05).结论:特异性阻断NF-κB p65的转录.可以抑制肿瘤细胞增殖,促进肿瘤细胞凋亡,参与细胞周期调控.NF-κB p65有望成为肿瘤基因治疗的靶点.
关键词： NF-κB p65基因 反义寡核苷酸技术 MTT 流式细胞术 -
反义寡核苷酸技术与眼科疾病
角膜损伤、白内障、青光眼、增殖性玻璃体视网膜病变都是可以致盲的眼科疾病,对此类疾病目前主要是采取药物及手术治疗,而手术不能阻止它们的再发.近年来,越来越多的研究者发现,反义寡核苷酸技术在以上眼科疾病的发生发展中起重要作用,并试图探索出一条新的防治途径.现就近年来国内外对于反义寡核苷酸技术与角膜损伤、白内障、青光眼、增殖性玻璃体视网膜病变的研究现状进行简要概述.
关键词： 反义寡核苷酸技术 角膜损伤修复 白内障 青光眼 增殖性玻璃体视网膜病变
