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雌激素剂量依赖性促进小鼠骨髓间充质干细胞的成骨分化
背景:绝经后骨质疏松的发病与雌激素水平的下降关系密切.目的:观察不同浓度雌激素对小鼠骨髓间充质干细胞成骨分化能力的影响,及其与微小RNA-26a的关系.方法:取小鼠股骨与胫骨骨髓,全骨髓贴壁法获得并纯化骨髓间充质干细胞,分别以0,10-10,10-9,10-8,10-7,10-6 mol/L的雌二醇对其成骨诱导过程进行干预.结果与结论:雌二醇对骨髓间充质干细胞的增殖能力影响不明显,但可明显提高其成骨能力;同时雌二醇可促进骨髓间充质干细胞成骨基因RUNX2,OCN mRNA及RUNX2,SP7蛋白的表达,以10-9 mol/L雌二醇的作用明显,但10-9 mol/L雌二醇促进微小RNA-26a mRNA表达的能力弱.说明雌二醇可剂量依赖性促进骨髓间充质干细胞的成骨分化,微小RNA-26a可能在此过程中发挥作用.
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血清miR-26a、miR-122、AFP联合检测对肝癌的诊断效能
目的 分析血清微小RNA(miR)-26a、miR-122联合甲胎蛋白(AFP)检测对肝癌的诊断效能.方法 分别选择肝癌患者114例纳入肝癌组、肝炎患者87例纳入肝炎组、健康体检者94例纳入对照组.采集三组血清样本,采用qRT-PCR法检测miR-26a、miR-122,采用电化学发光法检测血清AFP.构建受试者工作特征(ROC)曲线并计算曲线下面积(AUC)来评估miR-26a、miR-122、AFP检测诊断肝癌的敏感度及特异度.结果 肝癌组miR-26a相对表达量低于肝炎组和对照组,AFP水平高于肝炎组和对照组,肝癌组、肝炎组、对照组miR-122相对表达量依次降低(P均<0.05).miR-26a单项检测诊断肝癌AUC为0.738,敏感度和特异度分别为52.1%、94.3%;miR-122单项检测AUC为0.828,敏感度和特异度分别为79.9%、84.8%;AFP单项检测AUC为0.801,敏感度和特异度分别为59.2%、93.7%;miR-26a、miR-122、AFP联合检测AUC为0.926,敏感度和特异度分别为86.4%、82.5%,三项指标联合检测对肝癌的诊断效能高于单一指标检测.miR-26a单项检测鉴别诊断肝癌与肝炎AUC为0.752,敏感度和特异度分别为73.9%、72.4%;miR-122单项检测AUC为0.688,敏感度和特异度分别为78.2%、59.4%;AFP单项检测AUC为0.701,敏感度和特异度分别为58.3%、92.6%;miR-26a、miR-122、AFP联合检测AUC提高到0.865,敏感度和特异度分别为76.5%、85.1%,三项指标联合检测对肝癌和肝炎的鉴别诊断效能优于单项指标检测.结论 血清miR-26a、miR-122单项检测在肝癌诊断、肝癌与肝炎鉴别诊断中均有一定应用价值;miR-26a、miR-122、AFP联合检测的诊断效能高于单一指标检测.
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微小RNA-26a对食管癌Eca109细胞增殖、迁移、凋亡及细胞周期的影响
目的 探讨微小RNA-26a(miR-26a)对食管癌Eca109细胞增殖、迁移、凋亡和细胞周期的影响.方法 将正常培养的人食管鳞状细胞癌Eca109细胞随机分为正常对照组(正常培养的不加任何类型慢病毒的Eca109细胞)、阴性对照组(转染随机序列慢病毒)及miR-26a过表达组(转染miR-26a过表达慢病毒).分别采用四甲基偶氮唑盐实验、细胞划痕实验、流式细胞术检测细胞增殖、迁移、细胞周期和凋亡情况.结果 转染后72、96h,miR-26a过表达组细胞增殖能力低于正常对照组和阴性对照组(P＜0.05);阴性对照组与正常对照组细胞增殖能力比较差异无统计学意义(P＞0.05).转染后72 h,miR-26a过表达组细胞划痕愈合率低于正常对照组和阴性对照组(P＜0.05);阴性对照组与正常对照组细胞划痕愈合率比较差异无统计学意义(P＞0.05).转染后48 h,miR-26a过表达组G1、G2期细胞所占比例高于正常对照组和阴性对照组,S期细胞所占比例低于正常对照组和阴性对照组(P＜0.05).阴性对照组与正常对照组细胞G1、S和G2期细胞所占比例比较差异无统计意义(P＞0.05).结论 miR-26a可以抑制人食管鳞状细胞癌Eca109细胞增殖和迁移,阻断细胞由G1期向S期过渡,但对细胞的凋亡无明显影响.
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微小RNA-26a通过靶向调控E2F7表达影响乳腺癌细胞增殖与迁移
目的 观察微小RNA(miRNA,miR)-26a通过靶向调控核转录因子(E2F7)表达影响乳腺癌细胞增殖与迁移.方法 实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)法及Western blot分别检测miR-26a、E2F7在乳腺癌细胞BT549、MDA-MB-231、MDA-MB-435、MCF-7及人正常乳腺上皮细胞(MCF-10A)中的表达.脂质体LipofectamineTM 3000将miR-26a mimics和miR-26a NC转入乳腺癌细胞中,并检测miR-26a表达、细胞活力、细胞凋亡率、细胞迁移能力、E2F7蛋白及mRNA表达,同时进行荧光素酶报告基因分析.结果 miR-26a在BT549(0.40±0.04)、MDA-MB-231 (0.35±0.02)、MDA-MB-435(0.42±0.03)、MCF-7(0.55±0.05)乳腺癌细胞中的表达量显著低于MCF-10A细胞(1.46±0.14) (P＜ 0.01).E2F7蛋白在BT549(1.25±0.12)、MDA-MB-231(3.10±0.31)、MDA-MB-435(2.18 ±0.21)、MCF-7 (0.36±0.02)乳腺癌细胞中的表达量显著高于MCF-10A细胞(0.15±0.01) (P ＜0.01).miR-26a mimics组中miR-26a表达量(1.84 ±0.18)高于miR-26a NC组(0.36±0.03) (P ＜0.01);miR-26a mimics组细胞活力(0.383±0.036)低于miR-26a NC组(0.589±0.060) (P ＜0.01);miR-26a mimics组细胞早期凋亡率[(16.51±1.65)％]和晚期凋亡率[(23.47±2.35)％]均高于miR-26a NC组[(2.58±0.26)％、(3.20 ±0.32)％] (P＜0.01).miR-26a mimics组细胞迁移能力(42.36±4.23)低于miR-26a NC组(189.53±15.64) (P＜0.01).miR-26a mimics组中E2F7蛋白及mRNA表达量均较miR-26a NC组下调(P＜0.01),且荧光素酶报告基因结果证实E2F7是miR-26a下游靶蛋白.结论 miR-26a能够通过负性调控E2F7表达抑制MDA-MB-231细胞增殖与迁移.
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微小RNA-26a对三阴性乳腺癌细胞迁移和侵袭的调控作用
目的 检测微小RNA(miRNA,miR)-26a在三阴性乳腺癌中的表达并观察miR-26a对三阴性乳腺癌细胞迁移和侵袭的影响.方法 通过对三阴性乳腺癌及癌旁组织样本进行miRNA测序,筛选出癌组织及癌旁组织中差异表达的miRNAs.应用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)技术检测miR-26a在三阴性乳腺癌组织样本及细胞株中的表达.采用Transwell小室法及划痕实验检测miR-26a对细胞迁移和侵袭能力的影响.结果 miRNA测序分析,共21个miRNAs在三阴性乳腺癌组织及癌旁组织中存在差异表达,其中12个miRNAs在癌组织中表达上调,包括miR-26a在内的9个miRNAs在癌组织中表达下调.在9例三阴性乳腺癌手术切除标本中,癌组织中miR-26a的表达水平较癌旁组织明显降低(1.08±0.12比78.62±1.44、3.60±0.49比36.57±0.86、5.22±0.76比27.64±0.89、0.59±0.02比26.32±0.69、2.05±0.23比19.36±0.74、1.88±0.13比14.49±0.80、1.03±0.07比8.92±0.37、4.69±0.35比6.75土0.52、0.81±0.05比2.89±0.17,P＜0.01).7种细胞株(MDA-MB-231、BT474、MDA-MB-468、T47D、SKBR3、MCF10A、MCF-7)中,三阴性乳腺癌细胞株(MDA-MB-231、MDA-MB-468)中miR-26a的表达水平明显低于MCF-10A(0.61±0.05比1.50±0.11、0.09±0.01比1.50±0.11,P＜0.01).Transwell迁移实验显示,miR-26a模拟物(mimic)转染组细胞的穿膜细胞数量显著低于miR-mimic阴性对照(NC)转染组的细胞[(613.33±18.04)个比(701.33±6.11)个;(191.33±9.02)个比(269.33±8.33)个,P＜0.01];划痕实验显示,miR-26amimic转染组的细胞较miR-mimic NC转染组的细胞更慢地靠近划痕区域.结论 miR-26a在三阴性乳腺癌中低表达,并具有抑制三阴性乳腺癌细胞迁移和侵袭的作用.
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微小RNA-26a通过靶向癌基因c-Myc抑制三阴性乳腺癌细胞的增殖
目的 观察微小RNA(miRNA,miR)-26a对三阴性乳腺癌细胞增殖的影响,并探讨其机制.方法 通过噻唑蓝(MTT)实验及集落形成实验检测miR-26a对细胞增殖能力的影响,应用流式细胞技术检测miR-26a对细胞周期的影响.利用数据库miRTarBase预测miR-26a靶基因,在数百种靶基因中,筛选出与细胞周期及肿瘤转移密切相关的靶基因c-Myc作为研究对象.通过Westernblot实验检测miR-26a过表达后细胞中c-Myc及其下游靶基因细胞周期蛋白D2(Cyclin D2)、细胞周期蛋白E1(Cyclin E1)蛋白水平的表达.结果 MTT实验显示,miR-26a模拟物(mimic)转染组细胞的增殖活力显著低于miR-mimic阴性对照(NC)转染组的细胞.集落形成实验显示,miR-26a mimic转染组细胞的克隆增殖能力显著低于miR-mimic NC转染组的细胞[(55.67 ±5.86)个比(144.33±5.03)个;(62.00±3.00)个比(107.67±2.52)个,P＜0.01].流式细胞技术显示,miR-26a mimic转染组细胞处于G1期的细胞比例明显高于miR-mimic NC转染组的细胞[(59.39±1.04)％比(46.91±1.04)％;(76.91±1.43)％比(63.21±1.61)％,P＜0.01].Western blot实验显示,细胞中miR-26a表达上调后,c-Myc及其下游靶基因Cyclin D2、Cyclin E1的蛋白表达水平显著降低.结论 miR-26a可抑制三阴性乳腺癌的增殖,其机制可能是miR-26a通过靶向癌基因c-Myc来发挥抑癌作用.
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miR-26a通过NRAS和E2FE途径增强胃癌细胞对顺铂敏感性的研究
目的：探讨miR-26a通过NRAS和E2FE途径增强胃癌细胞对顺铂的敏感性。方法实时定量PCR检测miR-26a在顺铂耐药细胞株SGC-7901/DDP和非耐药SGC-7901细胞株中的表达；MTS法分析miR-26a对顺铂敏感性的影响；膜联蛋白/碘化丙啶（PI）双染色法和流式细胞仪检测调亡。荧光素酶报告性分析和基因检测鉴定miR-26a靶标；另外，MTS和细胞凋亡分析评估NRAS和E2F2化疗的敏感性。结果与SGC-7901细胞比，miR-26a在SGC-7901/DDP中的表达降低。运用功能获得和失活实验分析，证实了miR-26a能增强胃癌细胞对顺铂的敏感性。同时发现NRAS和E2F2的3′-UTR端存在miR-26a靶位点，且miR-26a能下调NR S和E2F2的表达。此外敲除NRAS或E2F2可增加胃癌细胞对顺铂敏感。结论通过miR-26a的靶标NRAS和E2F2能增强胃癌细胞对基于顺铂化疗的敏感性；同时，证明了miR-26a可作为胃癌化疗的潜在增敏剂。
