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猫爪草皂苷对结肠癌LoVo细胞凋亡和线粒体电位的影响
目的:探讨猫爪草皂苷(Radix ranunculus temate saponins,RRTS)对人结肠癌LoVo细胞的增殖和凋亡作用及作用机制.方法:按猫爪草皂苷浓度分为1、10、100、500μg·mL-14个处理组和对照组(未加猫爪草皂苷),处理LoVo细胞不同时间后,倒置显微镜现察细胞形态;采用MTT法检测细胞增殖的抑制情况;流式细胞仪(FCM)分析细胞周期和凋亡率.结果:与对照组比较,猫爪草皂苷处理组可使细胞明显变圆、体积缩小、脱壁细胞增多;MTT法检测显示,猫爪草皂苷处理组随着浓度的增加和作用时间延长,对LoVo细胞的增殖抑制作用增强,并呈时间、剂量依赖性(P<0.001);随着浓度的增加凋亡率增加,药物组与对照组比较差异有显著性(P<0.001);流式细胞仪细胞周期分析图可看出细胞阻滞在C1期,随着给药浓度的增加,细胞凋亡峰(AP峰)越来越明显(图1);激光共聚焦扫描技术观察显示,细胞经皂苷作用4h、8h、12h后,线粒体膜电位下降(P<0.05).结论:猫爪草皂苷可导致人结肠癌LoVo细胞线粒体膜电位下降,具有明显抑制增殖和诱导凋亡作用.
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猫爪草皂苷对结肠癌LoVo细胞增殖和凋亡影响的研究
目的:探讨猫爪草皂苷(Radix ranunculus ternate saponins,RRTS)对人结肠癌kIVo细胞增殖和凋亡的作用及其机制.方法:按猫爪草皂苷浓度分为1、10、100、500μg/mL4个处理组和对照组(未加猫爪草皂苷),处理LoVo细胞不同时间后,倒置显微镜观察细胞形态;采用MTT法检测细胞增殖的抑制情况;荧光染色观察细胞凋亡;流式细胞仪(FCM)进行细胞周期分析;采用细胞免疫化学检测凋亡相关基因Bax、Bcl-2、Caspase-3表达的变化.结果:与对照组比较,猫爪草皂苷可使细胞明显变圆、体积缩小、脱壁细胞增多;MTT法检测显示,猫爪草皂苷处理组随着浓度的增加和作用时间延长,Lovo细胞增殖的抑制作用增强,并呈时间、剂量依赖性(P<0.001);荧光显微镜下部分细胞发生凋亡形态学改变,对照组和4个猫爪草皂苷不同浓度处理组凋亡率分别为(3.57±1.56)%、(8.14±1.02)%、(11.11±2.30)%、(17.59±0.95)%和(25.10±1.23)%;流式细胞术显示.G1期细胞增加,而停滞在s、G2期细胞减少;细胞免疫化学检测发现,经猫爪草皂苷作用24h后,LoVo细胞Bax蛋白水平明显增高,而Bcl-2出现抑制,Bcl一2/Bax比例下降,Caspase-3蛋白水平明显升高,且呈明显的浓度依赖性.结论:猫爪草皂苷具有明显抑制人结肠癌LoVo细胞增殖和诱导凋亡作用,下调Bcl-2、Bcl-2/Bax,增加Bax、Caspase-3蛋白的表达可能是其作用机制之一.
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猫爪草皂苷对结肠癌LoVo细胞凋亡和细胞内Ca2+浓度的影响
目的:探讨猫爪草皂苷(Radix ranunculus tenate saponins,RRTS)对人结肠癌LoVo细胞增殖和凋亡的调控作用及其机制.方法:按猫爪草皂苷浓度分为1、10、100、500 μg·ml-14个处理组和对照组(未加猫爪草皂苷),处理LoVo细胞不同时间后,倒置显微镜观察细胞形态;采用MTT法检测细胞增殖的抑制情况;流式细胞仪(FCM)进行细胞周期分析并计算凋亡率;激光共聚焦(LCSM)测定皂苷对LoVo胞内Ca2+浓度的影响.结果:与对照组比较,猫爪草皂苷处理组可使细胞明显变圆、体积缩小、脱壁细胞增多;对LoVo细胞的增殖抑制作用增强,随着浓度的增加凋亡率增加,可看出细胞阻滞在G1期,随着给药浓度的增加,细胞凋亡峰(AP峰)越来越明显.作用于LoVo细胞4 h后,胞内Ca2+明显上升,4 h.8 h时略有下降,但仍维持在较高水平(P<0.001).结论:猫爪草皂苷具有明显抑制人结肠癌LoVo细胞增殖和诱导凋亡作用,引起凋亡的途径可能与Ca2+的增加有关.
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藤黄酸对人结肠癌LOVO、SW480细胞端粒酶的抑制作用
目的 探讨藤黄酸(GA)对人结肠癌LOVO、SW480细胞端粒酶的抑制作用及可能机制.方法 用不同浓度的藤黄酸作用体外生长的人结肠癌LOVO、SW480细胞,采用CCK-8法检测两株细胞增殖抑制率,蛋白质印迹法(Western blot)检测两株细胞hTERT蛋白表达,实时荧光定量QRT-PCR法检测hTERT mRNA表达.结果 藤黄酸对人结肠癌LOVO、SW480细胞具有显著抑制增殖作用,并呈现明显的浓度及时间依赖性(P＜0.05或P＜0.01);Western blot结果显示,藤黄酸能降低LOVO、SW480细胞hTERT蛋白的表达,且呈浓度依赖性(P＜0.05或P＜0.01);QRT-PCR测定显示,藤黄酸能降低LOVO、SW480细胞hTERTmRNA的表达,呈浓度依赖性(P＜0.05或P＜0.01).结论 藤黄酸能够显著抑制人结肠癌LOVO、SW480细胞的增殖,其机制可能是通过下调hTERT mRNA的表达而有效地抑制癌细胞端粒酶活性.
关键词： 藤黄酸 结肠癌LoVo细胞 结肠癌SW480细胞 端粒酶 人端粒酶逆转录酶 -
扶正固本方水提物对结肠癌LOVO细胞体外增殖抑制作用的研究
目的:研究扶正固本方对结肠癌LOVO细胞株在体外增殖的抑制作用及其机制.方法:用不同浓度的扶正固本方水提物分别作用于对数期的LOVO细胞24小时及48小时,通过透射电镜观察细胞形态的变化并应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验检测细胞的增殖抑制率,流式细胞术检测细胞周期.结果:随药物浓度的增加和作用时间的延长,扶正固本方对lOVO细胞的杀伤作用逐渐增强(P＜0.05).作用48小时后,扶正固本方不同浓度含药组与空白组比较,G0/G1期细胞含量明显增多(P＜0.01),S期细胞含量明显减少(P＜0.01),以含药高浓度组作用为明显.结论:扶正固本方水提物可有效抑制结肠癌LOVO细胞的体外增殖,其机制与干扰S期细胞DNA合成有关.
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健脾化瘀方对裸鼠结肠癌皮下移植瘤及相关MicroRNAs的实验研究
目的:观察健脾化瘀方对人结肠癌Lovo细胞BALB/c裸鼠皮下移植瘤的抑瘤率以及对皮下移植瘤中结肠癌相关miRNAs表达的影响.方法:(1)取人结肠癌Lovo细胞接种于小鼠皮下,造成移植性裸鼠结肠癌模型.随机分为阴性对照组(NS组)、阳性对照组(5-FU组)、健脾化瘀方大剂量组、健脾化瘀方中剂量组、健脾化瘀方小剂量组.观察荷瘤鼠肿瘤生长情况、体积和重量,分析健脾化瘀方对Lovo细胞裸鼠皮下移植瘤的抑瘤率.(2)使用实时荧光定量PCR检测健脾化瘀方对结肠癌皮下移植瘤中miRNA31、miRNA143表达的影响.结果:(1)健脾化瘀方大、中剂量组小鼠瘤体体积及平均重量均小于阴性对照组(P＜0.01),差异具有统计学意义；(2)健脾化瘀方各剂量组中miRNA31的表达下调、miRNA143的表达上调.结论:健脾化瘀方对结肠癌Lovo细胞裸鼠皮下移植瘤有显著的抑制作用,其作用可能与下调miRNA31以及上调miRNA143的表达有关.
