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成纤维细胞生长因子4对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖的影响
目的 观察RA患者血清中成纤维细胞生长因子4(FGF4)的表达情况,并初步探讨FGF4对RA成纤维样滑膜细胞(FLS)增殖的影响及可能机制.方法 ①收集20例病情活动RA患者及20名与其年龄和性别相匹配的健康对照者的血清标本,蛋白芯片法检测血清FGF4的表达水平.②收集5例病情活动RA患者的滑膜组织,组织块法培养RA-FLS.采用重组人FGF4蛋白(rhFGF4)处理RA-FLS,应用CCK-8法检测细胞增殖率,流式细胞术检测细胞周期分布,蛋白质印迹法检测cyclin D1、phospho-Akt(p-Akt)及phospho-p38(p-p38)蛋白表达水平.2组间比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析或Kruskal-Wallis检验,两两比较采用Dunnett′s t检验,以P<0.05为差异有统计学意义.结果 ①活动性RA患者血清中FGF4表达水平高于健康对照组(P=0.041).②经不同浓度rhFGF4(分别为12.5、25、50、100 ng/ml)处理后,RA-FLS的细胞增殖率分别为:(121±8)％、(126±12)％、(129±12)％、(134±14)％,均高于对照组(100±0)％(P12.5=0.049,P25=0.009,P50=0.004,P100=0.001),G2/M+S期细胞所占的比例分别为:(12.6±3.6)％、(15.3±4.5)％、(17.1±5.1)％、(19.6±4.1)％,除12.5 ng/ml组外,其余各组G2/M+S期细胞所占的比例均高于对照组(5.4±2.4)％(P12.5=0.159,P25=0.042,P50=0.018,P100=0.005).与对照组相比,50 ng/ml组、100 ng/ml组的cyclin D1蛋白表达上调(P50=0.035,P100=0.027).浓度为50 ng/ml的rhFGF4可短时间内引起p-Akt和p-p38蛋白表达增加(P<0.01).结论 RA患者血清中FGF4表达增高,FGF4可能通过PI3K/Akt通路及p38-MAPK通路参与了RA-FLS增殖的调控,从而促进滑膜增生.
关键词： 关节炎 类风湿 成纤维细胞生长因子4 成纤维样滑膜细胞 细胞增殖 -
FGF4在肺癌组织中的表达及其对肺癌细胞增殖、转移的影响
目的 观察肺癌组织中成纤维细胞生长因子4(FGF4)的表达水平,探讨FGF4对肺癌细胞增殖和转移的影响.方法 取40例肺癌组织及其对应的癌旁组织,人高转移肺癌细胞A549、人低转移肺癌细胞NL9980、人肺成纤维细胞HFL1,用RT-PCR法检测组织和细胞中的FGF4 mRNA,Western blotting法检测细胞中的FGF4蛋白表达.取NL9980细胞,采用Lipo2000转染构建过表达FGF4的稳定细胞株NL9980-FGF4-oe,阴性对照为只转染pCDNA3.1的NL9980细胞(NL9980-NC);取A549细胞,采用Lipo2000转染构建敲除FGF4的稳定细胞株A549-FGF4-si,阴性对照为只转染pCDNA3.1的A549细胞(A549-NC).采用MTT法检测NL9980-NC、NL9980-FGF4-oe、A549-NC、A549-FGF4-si细胞的增殖能力,细胞划痕实验观察细胞迁移能力.结果 肺癌组织中FGF4 mRNA表达水平高于癌旁组织(P<0.05).FGF4 mRNA和蛋白表达水平A549>NL9980>HFL1(P均<0.05).NL9980-FGF4-oe细胞的增殖能力高于NL9980-NC,A549-FGF4-si细胞的增殖能力低于A549-NC细胞(P均<0.05).NL9980-FGF4-oe细胞的迁移距离大于NL9980-NC细胞,A549-FGF4-si细胞的迁移距离小于A549-NC细胞(P均<0.05).结论 FGF4在肺癌组织中表达升高,其过表达对肺癌细胞增殖及转移具有促进作用.
关键词： 成纤维细胞生长因子4 肺癌 细胞增殖 细胞转移 -
人 FGFR4基因重组质粒的构建及融合蛋白的表达
目的：探讨成纤维细胞生长因子4（ FGFR4）重组质粒的构建方法，并检测FGFR4融合蛋白的表达。方法从HepG2细胞中提取总RNA，采用RT-PCR方法扩增FGFR4的全长编码序列，双酶切后与pcDNA3．1／Myc-HisA载体连接，构建pcDNA3．1／Myc-HisA-FGFR4重组质粒。重组质粒经双酶切和测序鉴定后瞬时转染人胚肾HEK293细胞，采用Western blot法检测FGFR4融合蛋白的表达。结果 FGFR4编码序列被成功克隆至pcDNA 3．1／Myc-HisA质粒中，成功构建了pcDNA3．1／Myc-HisA-FGFR4载体。转染HEK293细胞后检测到FGFR4融合蛋白的稳定表达，分子量约为89 kD。结论成功构建了FGFR4全长编码基因重组质粒，并检测到转染后FGFR4蛋白在HEK293细胞中的表达。
关键词： 成纤维细胞生长因子4 质粒 转染 -
沉默FGF4表达对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响及其机制
目的 探讨沉默成纤维细胞生长因子4(FGF4)表达对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响及其机制.方法 取传2代对数生长期人乳腺癌细胞MCF-7(以下称MCF-7细胞),随机分为FGF4沉默组、阴性对照组、空白对照组,FGF4沉默组、阴性对照组按脂质体LipofectamineTM2000转染试剂说明分别转染siRNA、阴性对照序列,空白对照组不予转染.收集各组转染48 h细胞,采用MTT法检测再培养24、48、72 h细胞增殖抑制率.采用流式细胞术检测转染48 h早期凋亡率.采用Western blotting法检测转染48 h cyclin D1、caspase-3蛋白表达.结果 FGF4沉默组再培养24、48、72 h时细胞增殖抑制率均明显高于阴性对照组和空白对照组(P均<0.05),而空白对照组与阴性对照组比较差异均无统计学意义(P均>0.05).FGF4沉默组早期凋亡率明显高于阴性对照组和空白对照组(P均<0.05),而空白对照组与阴性对照组比较差异均无统计学意义(P均>0.05).FGF4沉默组cyclin D1蛋白相对表达量明显低于阴性对照组和空白对照组(P均<0.05),caspase-3蛋白相对表达量明显高于阴性对照组和空白对照组(P均<0.05),而空白对照组与阴性对照组比较差异均无统计学意义(P均>0.05).结论 沉默FGF4表达可抑制乳腺癌细胞增殖并促进其凋亡,其机制可能与抑制cyclin D1、促进caspase-3蛋白表达有关.
关键词： 乳腺癌 成纤维细胞生长因子4 细胞增殖 细胞凋亡 -
体外诱导人脐血间充质干细胞向肝细胞样细胞分化的研究
目的探讨人脐血间充质干细胞能否在体外诱导分化为肝细胞样细胞,并探索其定向诱导分化为肝细胞样细胞的分化机制.方法无菌条件下采集正常产妇脐血,用相对密度为1.077的淋巴细胞分离液分离脐血MNC,进而采用贴壁培养法获得MSC,流式细胞仪检测其表面标志.分别用HGF、FGF4、俩者联合、无生长因子四种处理因素,及含2%FBS的DMEM,1×ITS进行诱导培养,并于诱导前及诱导后的第7、14、21、28天留取细胞,RT-PCR法检测AFP、白蛋白及C-met、FGFR2mRNA的表达,免疫细胞化学法检测AFP、白蛋白、抗肝细胞抗体和CK18的表达,PAS法进行糖原染色,分析是否诱导出肝细胞样细胞.结果MSC强表达CD29、CD44,不表达CD34.诱导后7,21天分别检测出AFP,白蛋白mRNA及蛋白的表达,28天检测出CK18、抗肝细胞抗体的表达,21天、28天均可检测到糖原染色阳性细胞,随诱导时间的延长C-met,FGFR2 mRNA表达增高,HGF+FGF4诱导组肝系细胞标志阳性率均高于单独生长因子诱导组(P＜0.05);单独生长因子诱导组间无明显差异(P＞0.05).无生长因子诱导组在以上时间点均未检测到上述指标.结论HGF、FGF4均能诱导人脐血MSC分化为具有肝系细胞表型和功能的细胞,且二者在一定程度上有联合作用.生长因子与其相应受体之间,可能存在正反馈调节机制.
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成纤维细胞生长因子4在阿糖胞苷所致拇指多指畸形鼠体内表达变化的研究
目的 研究成纤维细胞生长因子4 (FGF-4)在阿糖胞苷所致的拇指多指畸形鼠的肢芽中表达的变化;探索多指畸形的形成机制.方法 运用腹腔注射阿糖胞苷的方法建立拇指多指畸形鼠的动物模型,选择不同给药时间的孕鼠(11.5 d、12.5d、13.5d、14.5 d),采用整体原位杂交的方法检测胚胎鼠肢芽的间充质细胞中FGF-4的表达;采用HE染色及软骨染色的方法检测胚胎鼠骨骼及软组织的发育情况;对正常出生的畸形鼠进行X线摄片,以进一步确定骨骼发育的畸形变化.结果 在给药组所产生的鼠胚中,通过整体原位杂交方法检测,FGF4表达在给药组中11.5d、12.5d、13.5d和14.5d时FGF4表达的相对面积分别为22.21％、84.81％、58.43％和47.59％,而空白组中各天数的FGF4表达相对面积分别为6.74％、30.80％、19.64％和15.44％.FGF-4在肢芽的表达比正常组明显增多,其所分布的范围比对照组广,持续的时间比对照组长.HE染色和软骨染色发现拇指多指畸形鼠的肢体骨骼呈现多掌骨及多指骨的畸形变化.结论 FGF-4在阿糖胞苷所致的拇指多指畸形鼠的肢芽呈现高表达.
关键词： 成纤维细胞生长因子4 多指(趾)畸形 阿糖胞苷 原位杂交
