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线粒体/细胞色素C介导的凋亡通路的研究进展
线粒体凋亡途径在细胞凋亡信号转导途径中是近年来研究的热门.细胞内外各种刺激信号引起Bcl-2同源结构域3(Bcl-2 homology domain3,BH3)-only蛋白激活,通过Bcl-2家族(B cell lymphoma 2)调控线粒体,使线粒体外膜渗透而导致细胞色素C及(second mitochondri-derived activator of caspase,Smac)流入胞质与凋亡活化因子-1(apoptosis activated factor-1,Apaf-1)及胱天蛋白酶-9(caspase-9)结合形成复合体.caspase-9的激活将引起其下游胱天蛋白酶的级联反应,导致该细胞凋亡.这一过程中有一系列反馈调节如Smac对凋亡抑制蛋白(IAP)的抑制等.
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细胞色素C与caspase家族在缺血/再灌注所致心肌细胞凋亡中的作用
细胞凋亡是由基因控制的细胞自主有序的死亡.心肌缺血/再灌注所致心肌细胞死亡主要是由细胞凋亡所引起的.细胞色素C和caspases家族是启动凋亡程序的关键物质,在心肌细胞凋亡中发挥着至关重要的作用.抑制细胞色素C和caspases家族的激活能有效能减少缺血/再灌注的心肌细胞凋亡.
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Bcl-2、CytC和caspase-3在实验性精索静脉曲张大鼠生精细胞中的表达及意义
目的 探讨实验性精索静脉曲张(EV)青春期大鼠生精细胞Bcl-2、细胞色素C(CytC)和caspase-3的表达及意义.方法 青春期雄性Wistar大鼠72只,随机分为6组,每组12只,分别为A1组、A2组、A3组、B1组、B2组、B3组,A1组、A2组和A3组为实验组,B1组、B2组和B3组为对照组.实验组大鼠通过行左肾静脉部分结扎术制作左侧精索静脉曲张模型(ELV);对照组只显露和游离左肾静脉,不结扎,其余步骤与实验组相同.模型建立后2、4、8周分别处死A1和B1组、A2和 B2组、A3和B3组大鼠,取左侧睾丸,并用免疫组化方法检测左侧睾丸生精细胞Bcl-2、CytC和caspase-3的表达,用TUNEL法检测左侧睾丸生精细胞的凋亡并计算凋亡指数(AI).结果 实验组大鼠Bcl-2表达较对照组显著降低(P ＜ 0.05),而实验组CytC、caspase-3表达较对照组明显升高(P ＜ 0.05),实验组AI较对照组明显升高(P ＜ 0.05).结论 精索静脉曲张大鼠生精细胞Bcl-2表达降低,CytC和caspase-3表达升高,从而导致睾丸生精细胞凋亡增加.
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大剂量细胞色素C治疗一氧化碳中毒后迟发性脑病的临床观察
目的 研究大剂量细胞色素C治疗急性一氧化碳中毒迟发性脑病的疗效.方法 用细胞色素C 90mg静脉滴注治疗一氧化碳中毒后迟发性脑病患者,并对其疗效进行分析.结果 急性一氧化碳中毒迟发性脑病患者临床表现复杂多样,以痴呆、智能障碍、二便失禁为主.治疗主要为高压氧疗、大剂量细胞色素C及其他辅助治疗.结论 大剂量细胞色素C治疗急性一氧化碳中毒迟发性脑病疗效肯定,值得推广.
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线粒体-细胞色素C途径在兔非酒精性脂肪肝肝细胞凋亡中的作用
目的：探讨线粒体-细胞色素C途径在兔非酒精性脂肪肝（ non-alcoholic fatty liver disease，NAFLD）肝细胞凋亡中的作用。方法雄性日本大耳兔40只，随机分为正常对照组（8周）和NAFLD模型组（4、6、8周组），每组各10只。模型组按1.2 mL／kg皮下注射花生油，2次／周，建立日本大耳兔NAFLD模型。按各组时间点处死兔子，测定兔血清中生化指标水平；HE染色观察肝组织病理形态改变，流式细胞仪检测肝细胞凋亡率；提取肝脏线粒体，分光光度法检测线粒体通透转换孔（ mitochondrial permeability transition pore， MPTP）的状态变化；免疫组织化学法检查Bcl-2、Bax、细胞色素C和caspase-3在肝组织中的表达情况；Western blot检测细胞色素C 以及caspase-3含量变化。结果与正常对照组相比，模型组肝脏脂质代谢指标和相关炎症因子表达水平升高，模型组肝细胞凋亡率与对照组比较显著增加（ P＜0.01）。造模4周时出现肝功能损伤，脂质代谢紊乱，随着NAFLD病程的发展， Bcl-2、Bax、细胞色素C和caspase-3表达量逐渐增加，线粒体通透转换孔开放率随高脂饮食饲养时间延长明显增加（P＜0.01）。结论线粒体-细胞色素C途径在NAFLD引起的肝细胞凋亡中起到了一定的调控作用。
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人参皂甙Rg3对乳腺癌MCF-7线粒体凋亡途径的影响
目的 探讨20(R)-人参皂Rg3(SPG-Rg3)对人乳腺癌MCF-7细胞的诱导凋亡作用及其可能机制.方法 人乳腺癌细胞MCF-7细胞株分为空白对照组、实验对照组及SPG-Rg3多个浓度组.利用MTT法观察人参皂甙Rg3对MCF-7细胞生长的抑制作用,并计算出IC50,进一步确定其有效浓度;流式细胞术检测人参皂甙Rg3作用后MCF-7细胞周期的变化;利用Annexin V-EGFP/PI双染法,检测人参皂甙Rg3 诱导MCF-7细胞凋亡情况;免疫细胞化学染色检测MCF-7细胞凋亡与Fas,FasL蛋白表达的关系.结果 SPG-Rg3作用48h的IC50为244.54μg/mL.流式细胞仪检测Rg3使MCF-7的S期细胞比率明显增加(P<0.01),凋亡率明显增加(P<0.01).免疫细胞化学显示Rg3能使MCF-7细胞胞浆内细胞色素C增加(P<0.01).结论 SPG-Rg3能诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡,其机制可能与诱导线粒体释放细胞色素C有关.
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安脑丸对大鼠大脑皮质神经元氧糖剥夺损伤的防护作用
目的 探讨安脑丸对神经元缺氧缺糖损伤大鼠模型细胞凋亡的防护作用.方法 体外培养新生SD大鼠皮层神经元,完全随机分为正常对照组、模型组及安脑丸高、中、低剂量组.正常对照组正常培养,模型组及安脑丸各剂量组建立氧糖剥夺模型,安脑丸各剂量组加不同浓度(分别稀释10、20、30倍)含药血清的培养液,测定各组细胞存活率及凋亡率,免疫印迹法检测caspase-12、细胞色素C、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、Bcl-2表达量的变化.结果 与正常对照组相比,氧糖剥夺模型组细胞凋亡率增加[(22.0±2.2)％比(3.2±0.6)％,P＜0.05],存活率明显降低[(62.4±4.6)％比(100.0±3.1)％,P＜0.05]；GRP78表达上调(P＜0.05),细胞色素C蛋白表达增加(P＜0.05),caspase-12表达增加(P＜0.05),Bcl-2表达减少(P＜0.05).安脑丸低、中、高剂量组细胞存活率分别为(74.9±2.7)％、(83.0±2.2)％、(75.2±2.8)％,均明显高于模型组(均P＜0.05)；安脑丸中剂量组细胞存活率明显高于安脑丸低、高剂量组(均P＜0.05).安脑丸中剂量组与模型组比较,24 h凋亡率明显减少[(10.4±0.7)％比(22.0±2.2)％,P＜0.05]；细胞Bcl-2表达增加(P＜0.05),细胞色素C释放和caspase-12的表达减少(均P＜0.05).结论 安脑丸对氧糖剥夺诱导的皮层神经元细胞凋亡有防护作用.
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慢性高原病患者骨髓CD71+有核红细胞凋亡和细胞色素C及线粒体膜电位的变化
目的 探讨慢性高原病(CMS)患者骨髓CD71+有核红细胞凋亡和细胞色素C(Cyt-C)及线粒体膜电位(MMP)的变化情况.方法 以14例CMS患者及15例单纯陈旧性骨折患者分别为CMS组和对照组,提取骨髓单个核细胞(BMMNC),CD71单克隆抗体标记、Annexin V-FITC/PI染色,流式细胞术检测CD71+有核红细胞的凋亡指数,磁珠分选法分选CD71+有核红细胞并以RT-qPCR检测Cyt-C mRNA的表达水平;JC-1染色流式细胞术检测CD71+有核红细胞MMP.结果 CMS组骨髓CD71+有核红细胞凋亡指数为(1.9±1.4)％明显低于对照组(3.2±1.5)％,差异有统计学意义(P＜0.05).CMS组Cyt-C mRNA表达水平(0.72±0.14)明显低于对照组(1.00±0.15),差异有统计学意义(P＜0.01).CMS组MMP(5.0 ±2.2)明显高于对照组(3.3 ±0.9),差异有统计学意义(P＜0.05).CMS患者骨髓CD71+有核红细胞凋亡指数与血红蛋白水平呈负相关(r=-0.569,P=0.034),凋亡指数、MMP及Cyt-C mRNA间未发现明显相关性.结论 CMS患者骨髓CD71+有核红细胞凋亡指数下降,且与血红蛋白水平呈负相关,说明有核红细胞凋亡下调可能与CMS红细胞积累有关;CD71+有核红细胞MMP增高,Cyt-C mRNA相对表达水平明显降低,提示线粒体通路变化参与CMS患者骨髓CD71+有核红细胞凋亡下降机制,而CD71+有核红细胞凋亡指数、MMP、Cyt-C mRNA水平之间没有发现明显的相关性,提示CMS造血细胞凋亡机制的复杂性.
关键词： 慢性高原病 CD71+有核红细胞 细胞凋亡 细胞色素C 线粒体膜电位 -
PBDE-47对人神经母细胞瘤细胞凋亡和线粒体膜电位及细胞色素C蛋白表达的影响
目的 探讨PBDE-47对人神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞线粒体膜电位和细胞色素C(Cyt C)蛋白表达的影响及其与细胞凋亡的关系.方法 将处于对数生长期的SH-SY5Y细胞分别加入终浓度为0(溶剂对照组)、1、5、10μmol/L的PBDE-47暴露24 h.采用流式细胞术检测细胞凋亡率和线粒体膜电位变化,采用Western blot技术检测胞浆与线粒体细胞色素C蛋白表达的水平.结果 与溶剂对照组相比,10 μmol/L PBDE-47染毒组SH-SY5Y细胞凋亡率和5、10 μmol/L PBDE-47染毒组胞浆内细胞色素C蛋白表达水平均明显升高,10 μmol/L PBDE-47染毒组线粒体膜电位和各浓度PBDE-47染毒组线粒体内细胞色素C蛋白表达水平均明显下降,差异均有统计学意义(P＜0.05).且随着PBDE-47染毒浓度的升高,SH-SY5Y细胞凋亡率和胞浆内细胞色素C蛋白表达水平呈升高趋势,线粒体内细胞色素C蛋白表达水平呈下降趋势.结论 PBDE-47可通过引起线粒体膜通透性转运孔开放和细胞色素C的释放介导SH-SY5Y细胞凋亡,从而对SH-SY5Y细胞产生损伤.
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锰对大鼠生精细胞半胱氨酰天冬氨酸酶-3和细胞色素C表达的影响
目的 研究锰对大鼠生精细胞中半胱氨酰天冬氨酸酶-3(caspase-3)和细胞色素C(cytochrome-c)表达的影响.方法 将健康雄性清洁级SD大鼠48只随机分为高(30 mg/kg)、低剂量(15 mg/kg)MnCl2染毒组和空白对照组(生理盐水),每组16只.采用腹腔注射方式染毒,每天1次,每周5天,连续染毒6周.分别于染毒第4、6周末称重,处死大鼠.分离睾丸,采用免疫组化法检测睾丸生精细胞中caspase-3与cytochrome-c的阳性细胞率.并进行病理学观察.结果 与空白对照组比较,高、低剂量MnCl2染毒组大鼠生精细胞中caspase-3阳性细胞率均升高,cytochrome-c阳性细胞率均降低.差异有统计学意义(P<0.01);且随着锰染毒剂量的升高,大鼠生精细胞中caspase-3阳性细胞率呈上升趋势.cytochromme-c阳性细胞率呈下降趋势.与染锰第4周比较,高、低剂量MnCl2染毒组第6周大鼠生精细胞中caspase-3阳性细胞率均升高,cytochrome-c阳性细胞率均降低,差异有统计学意义(P<0.01).直线相关分析发现,各组大鼠生精细胞caspase-3阳性细胞率与cytochrome-c阳性细胞率呈显著负相关(r=-0.876,P<0.01).结论 染锰可通过线粒体途径促进大鼠生精细胞caspase-3 表达,而降低cytochrome-c表达,且存在一定的剂量-效应和时间-效应关系.这可能是导致大鼠生精障碍的主要机制之一.
关键词： 锰 大鼠 生精细胞 半胱氨酰天冬氨酸酶-3 细胞色素C -
五价钒致神经细胞凋亡中细胞色素C和caspase-9,3蛋白的变化
目的 研究五价钒致神经细胞凋亡中细胞色素C(Cyt-c)、caspase-9及caspase-3蛋白的变化,为进一步研究五价钒致神经细胞凋亡的作用机制提供资料.方法 用5、10、20 mmol/L的五氧化二钒(V2O5)体外培养大鼠神经元细胞染毒,用原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡的程度;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Cyt-c、Caspase-9、Caspase-3蛋白表达.结果 TUNEL检测结果显示,在细胞核中可以见到凋亡小体,随着染毒剂量增高凋亡小体的细胞数逐渐增多.与对照组比较,0、20 mmol/L染毒组凋亡指数明显增高,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).Western blot法检测结果显示,与对照组比较,5 mmol/L染毒组的Cyt-c、caspase-3蛋白表达明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05); 10、20 mmol/L染毒组的Cyt-c、caspase-9、caspase-3蛋白表达明显升高,差异有统计学意义(P＜0.01).神经细胞凋亡指数AI与Cyt-c、caspase-9、caspase-3呈正相关(r=0.954,P＜0.01;r=0.938,P＜0.0;r=0.943,P＜0.01).结论 五价钒能诱导神经细胞凋亡,Cyt-c、caspase-9及caspase-3蛋白表达在五价钒致神经细胞凋亡的过程中发挥了重要的调控作用.
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褪黑素对溴氰菊酯致大鼠海马神经细胞Bcl-2和细胞色素C表达及细胞凋亡率的影响
目的 观察褪黑素(MT)对溴氰菊酯(DM)引起的大鼠大脑海马脑神经细胞凋亡率、Bcl-2蛋白表达水平及细胞色素C表达的影响.方法 40只Wistar雌性大鼠随机分为5组:橄榄油对照组(1 ml/kg橄榄油)、单纯DM组(12.5 mg/kg DM)、DM+MT25组(25.0 mg/kg MT+12.5mg/kg DM)、DM+MT50组(50 mg/kg MT+12.5 mg/kg DM)、DM+MT100组(100 mg/kg MT+12.5 mg/kg DM),每组8只,一次性给药24 h后,每组大鼠分别断头处死.应用流式细胞术测大鼠海马细胞凋亡率;应用免疫组化和计算机显微图像分析技术测大鼠海马神经细胞中Bcl-2蛋白表达水平和细胞色素C的表达.结果 DM+MT25、DM+MT50、DM+MT100各组Bcl-2蛋白表达水平分别为(45.26±3.84)、(39.40±4.04)、(34.40±4.52),明显低于对照组(59.33±4.03),但明显高于单纯DM组(20.73±3.34),差异均有统计学意义(P＜0.05);DM+MT25、DM+MT50、DM+MT100组的细胞色素C表达水平分别为(20.53±3.17)、(28.73±2.61)、(28.66±4.82),DM+MT50、DM+MT100组细胞色素C表达水平明显高于对照组,3个MT剂量组均明显低于对单纯DM组,且差异均有统计学意义(P＜0.05).3个MT剂量组神经细胞凋亡率分别为(15.00±1.77)%、(14.88±1.84)%、(11.75±1.93)%,明显低于单纯DM组(23.06±3.63)%,但高于对照组(5.69±1.37)%,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 MT能够抑制DM引起的大鼠海马神经细胞中Bcl-2蛋白水平的降低和细胞色素C的升高,抑制细胞凋亡率,MT可能通过改变蛋白的表达水平和抗凋亡能力发挥脑保护作用.
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苯并(a)芘致神经元线粒体膜电位和胞质细胞色素C的变化
目的 探讨苯并(a)芘[B(a)P]致神经元凋亡中线粒体膜电位和胞质中细胞色素C(CytC)蛋白变化.方法 选用新生1～3 d的SD大鼠分离大脑皮质进行神经元培养,在细胞培养第5天,选取生长良好的同批次神经细胞,以B(a)P同时加S9分别对神经元染毒,使B(a)P终浓度分别为0、10、20、40 μmol/L.继续培养40 h,应用Annexin V和碘丙啶(PI)双染法进行细胞凋亡的检测,加入Rh123,应用流式细胞仪测定细胞线粒体膜电位,免疫印迹(Western blot)法测定神经元胞质中Cyt C蛋白的表达.结果 随着B(a)P浓度的增加,神经细胞的早期、晚期凋亡率逐渐增高,中、高剂量组与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01),趋势检验表明,早期凋亡率增高具有剂量依赖性.随B(a)P染毒浓度的增加,神经细胞线粒体膜电位下降,低、中、高剂量组神经细胞膜电位分别为5.02±1.32、4.36±1.26、3.15±1.47,与对照组(8.89±2.18)比较,差异均有统计学意义(P<0.05),线粒体膜电位与早期凋亡率之间呈负相关(r=-0.763,P<0.05);随着B(a)P浓度的增加,胞质中Cyt C蛋白的表达逐渐升高,Cyt C蛋白表达与早期凋亡率间呈正相关(r=0.831,P<0.01).结论 B(a)P可致神经细胞凋亡,线粒体膜电位降低以及Cyt C的释放可能是诱发凋亡的主要因素.
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细胞凋亡在三氯乙烯致皮肤刺激性损伤中的作用
目的 研究细胞凋亡在三氯乙烯(TCE)引起BALB/c裸鼠皮肤损伤中的作用并探讨其机制.方法 将30只BALB/c裸鼠随机分为溶剂对照组、10%的TCE剂量组、20%TCE组、40%TCE组、80%TCE组、100%TCE组,应用TUNEL法检测TCE染毒的30只BALB/c裸鼠皮肤组织的细胞凋亡指数,应用免疫组化S-P法检测皮肤组织中easpase-8和cyt-c的表达.结果 电镜结果 显示高剂量组出现细胞调亡.40%、80%、100%TCE剂量组凋亡指数与对照组的差异有统计学意义(P<0.01);20%、40%、80%、100%TCE剂量组cyt c的表达水平分别为(2.60±0.54)、(3.42±0.56)、(5.81±1.30)、(6.00±0.70)明显高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.01),各组caspase-8表达差异无统计学意义(P>0.05).结论 TCE引起的早期皮肤组织损伤与细胞凋亡有关,而细胞凋亡可能与线粒体损伤有关.
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溴氰菊酯对大鼠脑组织线粒体膜通透性和细胞色素C表达的影响
目的研究溴氰菊酯(DM)对大鼠脑组织线粒体膜通透性及细胞色素C表达的影响.方法 Wistar大鼠随机分为实验组(4个不同染毒时间)和对照组,每组5只.实验组按12.5 mg/kgDM一次腹腔注射,5、24、48、72 h后处死;对照组一次腹腔注射5mg/kg的色拉油,分别提取大鼠大脑皮层和海马的线粒体,测定线粒体膜通透性、细胞色素C氧化酶,并测定大鼠大脑皮层、海马CA1、CA2、CA3、CA4区细胞色素C的表达.结果实验组与对照组相比,5、24、48、72 h组的线粒体膜通透性增大;皮层和海马CA1区、CA2区5、24、48 h组(0.57±0.04、0.67±0.09、0.58±0.04)、CA4区24h组(0.81±0.18)细胞色素C表达增强,吸光度值的差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01);CA2区72h组、CA3区及CA4区5、48、72 h组细胞色素C表达,吸光度值的差异则无统计学意义(P＞0.05);细胞色素C氧化酶的活力则受到抑制,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 DM能明显增加大鼠脑组织线粒体膜通透性,促使细胞色素C表达增强.
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山莨菪碱与细胞色素C治疗氨基甙类药物致聋
耳聋影响语言发育,也影响智力、心理和精神神经方面发育.造成听力残疾的主要原因是不正确使用各种耳毒性药物.我院自1996年以来应用山茛菪碱与细胞色素C治疗耳毒性药物致聋144例,疗效明显,现报道如下.
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Western blot检测小鼠内脏细胞色素C含量的改进和应用
细胞色素C(CytC)为104个氨基酸残基组成的单一肽链,是呼吸链的一个重要组成部分,也是呼吸链中唯一可提纯的细胞色素[1].由于CytC在临床和药理学中有着重要的研究价值[2-3],分析小鼠内脏器官该蛋白含量有着重要的意义.
关键词： Western bloc检测法 细胞色素C 改进 -
锰对大鼠生精上皮细胞色素C和波形蛋白表达及对生精功能的抑制效应
目的 研究氯化锰对大鼠生精细胞细胞色素C(cytochrome-c,cyto-c)和支持细胞波形蛋白(vimentin,VM)表达的影响及对生精功能的抑制效应.方法 将雄性SD大鼠随机分为空白对照、低剂量和高剂量组,8只/组.MnCl2组分别染锰4和6周,空白对照组给予等容生理盐水,给药途径均为腹腔注射,取睾丸采用免疫组织化学(SABC)法检测生精细胞cyto-c和支持细胞VM表达,测定睾丸脏器系数,取附睾检测精子数量和精子畸形率.结果 与空白对照组比较,各染锰组生精细胞cyto-c阳性率由80％下降至60％,VM阳性率由50％下降至2％,睾丸脏器系数由1.2％下降至1％,精子数量由1.1×107ml下降至0.2×107/ml,精子畸形率由28‰上升至64‰,且均呈一定的时间-效应关系和剂量-效应关系.各组大鼠精子数量与cyto-c和VM阳性率均呈正相关.结论 锰可诱导大鼠cyto-c和VM表达,抑制生精功能.
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大鼠肾小管上皮细胞缺血后处理模型的建立
目的 探讨用大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E建立一种可以用于缺血后处理研究的体外模型,并找到佳的后处理方案.方法 将NRK-52E随机分为4组:对照组(Sham),缺血再灌注(IRI)组,换液缺血后处理(HP)组,加液缺血后处理(HP+)组.通过体外糖氧剥夺3h后模拟缺血再灌注损伤.通过行循环10 min再灌注/10min缺血,建立肾缺血后处理的体外模型.流式细胞仪用于检测细胞凋亡.蛋白印迹法检测细胞质内细胞色素C蛋白水平.结果 NRK-52E经过细胞缺血再灌注24h后有明显凋亡(P＜0.05).部分后处理组凋亡明显减轻(P＜0.05),其中以HP+组保护效果佳.NRK-52经过细胞缺血再灌注24h后细胞质内细胞色素C蛋白的表达都明显升高(P＜0.05),缺血后处理组细胞相应的蛋白表达显著减轻,其中以HP+为显著.结论 成功建立NRK-52E缺血后处理的体外模型,其机制可能与通过抑制凋亡有关.
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芸香苷诱导K562细胞凋亡机制
目的研究芸香苷诱导白血病K562细胞凋亡过程中caspase-3基因及细胞色素C的表达.方法体外培养白血病K562细胞,MTT法观察细胞毒作用,测定IC50,Hoechst 33342/PI双荧光染色后,荧光显微镜下观察细胞核形态,流式细胞仪检测细胞周期,TRIZOL试剂提取K562细胞RNA,核酸定量仪检测纯度,RT-PCR扩增,紫外透射检测扩增产物,扩增产物测序,观察caspase-3的表达,4×10-5mol/L药物处理细胞后,分离细胞线粒体和胞浆,经SDS-PAGE电泳分离蛋白,Western blotting检测线粒体、细胞浆细胞色素C表达.结果芸香苷浓度为2×10-5、4×10-5、8×10-5 mol/L时,细胞生长受到显著抑制,并呈剂量依赖性;不同浓度芸香苷处理K562细胞44 h后,应用MTT比色法计算ICs0为4×10-5mol/L;4×10-5mol/L芸香苷处理细胞24 h后,Hoechest 33342/PI双荧光染色可观察到明显核固缩、凝集等细胞凋亡表现;流式细胞仪检测芸香苷处理后G2期细胞显著增多(64.7%),DNA合成受抑,凋亡率增加;PCR产物经过琼脂糖凝胶电泳,紫外透射仪下明显观察到500 bp条带,产物经过序列测定证实芸香苷处理细胞诱导caspase-3基因的表达Western Blotting检测线粒体细胞色素C表达水平下调,细胞浆出现明显细胞色素C蛋白条带.结论芸香苷诱导K562细胞caspase-3基因表达,细胞色素C通过线粒体膜进入胞浆,导致细胞线粒体功能异常,细胞发生凋亡,线粒体途径诱导白血病细胞凋亡是其作用机制之一.
