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实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠p38的变化及益肾达络饮的影响
目的:研究中药复方益肾达络饮对PLP139-151诱导的实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠中枢神经系统内p38的影响,探讨益肾达络饮在神经系统炎性脱髓鞘疾病中的作用机制.方法:采用免疫组化技术,测定各组小鼠中枢神经组织中p38蛋白含量.结果:p38表达正常组与模型组、激素组、中药组比较均有极显著性差异(P值均<0.01);与模型组比较,激素组有显著性差异(P<0.05),中药组有极显著性差异(P<0.01);激素组与中药组比较,有显著性差异(P<0.05).结论:EAE小鼠p38表达升高,提示EAE病变过程中可能激活p38MAPK信号转导通路.醋酸泼尼松、益肾达络饮均能降低EAE小鼠中枢神经组织内p38的表达,且益肾达络饮优于醋酸泼尼松.益肾达络饮对自身免疫性脑脊髓炎小鼠保护作用可能通过下调p38,抑制p38MAPK活化,从而改善机体免疫紊乱.
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p38/JNK MAPK信号通路在Th细胞分化中的作用
p38/JNK MAPK信号转导通路与多种肿瘤或增殖性疾病关系密切,是一条关键的调节细胞增生和凋亡的通路,是潜在的治疗分子靶点.目前4条MAPK信号转导通路:ERK1/2、JNK、P38和ERK5已鉴定,其中p38/JNK MAPK在不同的水平和方式中对Th细胞分化起着重要作用.就近年来有关p38/JNK MAPK信号通路及其在Th细胞分化中的作用研究概况作一综述.
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左、右归丸含药血清通过p38 MAPK信号通路干预BMSCs成骨诱导的研究
目的:基于p38信号通路探讨左、右归丸含药血清对BMSCs成骨诱导的机制.方法:运用全骨髓贴壁法分离和培养大鼠BMSCs;分别以左归丸、右归丸、两方共同药、滋肾阴药、补肾阳药、阳性对照药补佳乐制备的大鼠含药血清加诱导剂(地塞米松、维生素C、β-甘油磷酸钠)、诱导剂和空白含药血清组共8组对BMSCs进行干预,采用改良钙钴染色法检测碱性磷酸酶(ALP)表达,采用茜素红染色法检测钙化结节,采用Western blotting法检测核结合因子α1(Cbfα1)和Ⅰ型胶原(Col Ⅰ)、p38、p-p38蛋白表达,采用real time PCR法检测Cbfα1、Col Ⅰ mRNA表达.结果:左、右归丸及滋阴药组可以上调ALP表达,促进BMSCs矿化结节形成,增强Cbfα1、Col ⅠmRNA和蛋白的表达并且可以促进p38蛋白的磷酸化;给予p38特异性阻滞剂SB203580后,各组BMSCs ALP表达下调,矿化结节形成减少,p38蛋白磷酸化水平降低,并且Cbfα1、ColⅠ mRNA和蛋白的表达下降.结论:左、右归丸及其拆方含药血清可能部分通过p38 MAPK信号通路对BMSCs成骨分化产生调控作用的.
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p38、CHOP和细胞凋亡相关因子Bcl-2、Bax在PTSD大鼠中缝背核的表达
目的 从蛋白和基因水平上观察PTSD大鼠中缝背核神经元p38、CHOP和细胞凋亡相关因子Bcl-2、Bax的表达量变化.方法 采用国际上公认的的单一延长应激(single-prolonged stress,SPS)的方法建立PTSD大鼠模型;采用Morris水迷宫测试SPS刺激后大鼠的空间记忆和学习能力;采用Western blot及Real TimePCR检测PTSD大鼠中缝背核神经元p38、CHOP和细胞凋亡相关因子Bcl-2、Bax的蛋白及mRNA水平表达.结果 模型组大鼠平均逃避潜伏期显著高于正常对照组,而在目标象限停留的时间百分比明显低于正常对照组.SPS刺激后,PTSD大鼠中缝背核神经元p38、CHOP和细胞凋亡相关因子Bcl-2、Bax在蛋白和基因水平阳性表达比正常对照组增多.结论 SPS刺激使PTSD大鼠中缝背核神经元的p38-CHOP细胞凋亡信号通路激活,诱发了下游的级联反应,导致了中缝背核神经元的凋亡.
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遗传性癫痫大鼠海马ERK与p38蛋白的异常变化
目的 研究遗传性癫痫大鼠(Tremor,TRM)海马中p-ERK、ERK、p-p38和p38蛋白的表达.方法 以正常Wistar大鼠为对照组,PCR技术鉴定基因突变癫痫模型鼠TRM.提取大鼠海马组织后,应用免疫印迹法,检测大鼠海马中p-ERK、ERK、p-p38和p38的蛋白表达.结果 与正常Wistar大鼠相比,TRM鼠海马中p-ERK与p-ERK/ERK蛋白表达量升高,而ERK蛋白表达量不变;TRM鼠海马中p-p38与p-p38/p38蛋白表达量高于正常Wistar大鼠,而p38蛋白表达量不变.结论 TRM鼠海马中p-ERK与p-p38表达上调,可能与TRM癫痫发病机制相关.
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有丝分裂原激活蛋白激酶p38在佐剂关节炎大鼠滑膜及肺组织的表达
目的 研究有丝分裂原激活蛋白激酶(MAPK)-p38在佐剂关节炎(AA)大鼠滑膜及肺组织中表达,探讨类风湿关节炎(RA)的发病机制.方法 给大鼠右后足跖部皮下注射完全弗氏佐剂(CFA)复制RA的动物模型-AA.用原位杂交法检测p38mRNA在AA大鼠滑膜及肺组织中的表达.结果 AA大鼠滑膜和肺组织p38mRNA阳性细胞的平均灰度值(0～255,深～浅)明显低于正常大鼠(P＜0.01).AA大鼠滑膜的巨噬细胞,成纤维细胞和淋巴细胞的胞浆内均有p38mRNA的表达.肺组织中p38mRNA主要表达于巨噬细胞,单核细胞及浸润的淋巴细胞中. 结论 AA大鼠p38mRNA过表达与AA的滑膜及肺部病变有关,可能在RA的发病中有重要作用.
关键词： 佐剂关节炎 类风湿关节炎 有丝分裂原激活蛋白激酶 P38 -
应力缺失性骨质疏松模型大鼠p38信号通路以及通络生骨胶囊的干预
背景:应力缺失是导致运动不足人员骨质疏松发生的主要原因.通络生骨胶囊具有促进骨生成的作用,其对应力缺失模型大鼠p38 通路的影响未见报道.目的:观察应力缺失性骨质疏松大鼠p38 的变化,以及通络生骨胶囊对其改善作用.方法:将SD 大鼠随机分为4 组,除正常组外以鼠尾悬吊法制备动物应力缺失模型,药物低、高剂量组从造模次日起每日灌胃给予0.6,1.2 g/kg 的通络生骨胶囊.造模21 d,取腿骨,进行形态学观察;分离成骨细胞,Western blot 法测定p38蛋白含量.结果与结论:与正常组比较,模型组成骨细胞显著减少,骨小梁面积及其百分比、骨小梁厚度等显著降低,p38 表达总量显著升高,但磷酸化p38 与对照组无差异.高剂量的通络生骨胶囊可显著增加应力缺失大鼠成骨细胞个数,增大其骨小梁面积,促进磷酸化p38 的表达;而低剂量的通络生骨胶囊则降低了磷酸化p38 的表达.说明应力缺失可导致大鼠骨质疏松,高剂量的通络生骨胶囊可通过增强p38 磷酸化水平预防应力缺失导致的骨质疏松.
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结膜下注射50μmol/L p38信号转导通路抑制剂SB203580对角膜细胞的毒性
背景:p38 信号转导通路抑制剂SB203580 具有抗炎及抑制肿瘤血管生长的作用,但其刺激性和毒性成为眼表应用的障碍.目的:观察结膜下注射SB203580 对大鼠角膜的毒性作用.方法:分别于SD 大鼠右眼结膜下注射0.04 mL 50 μmol/L SB203580 或等量生理盐水,1 次/d,共7 d.注射后第7 天记录各组角膜炎症指数,并摘取角膜行组织学及透射电镜检查.结果与结论:裂隙灯显微镜下观察发现SB203580 注射部位结膜呈可逆性贫血状改变,在注射次日消失;注射SB203580或生理盐水后,大鼠角膜炎症指数差异无显著性意义(P > 0.05);但注射生理盐水后睫状充血程度重于注射SB203580 的大鼠(P < 0.05);组织学检查发现所有大鼠角膜上皮层完整,基质层排列规则,内皮层连续,透射电镜观察发现细胞结构及细胞器无明显异常.提示结膜下注射0.04 mL 50 μmol/L SB2036580 对大鼠角膜无明显毒性作用.
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青蒿琥酯对迟发型超敏反应小鼠脾脏T淋巴细胞的免疫调节作用
背景:青蒿琥酯是青蒿素低毒、高效的衍生物,具有免疫调节功能,但其具体机制仍需研究阐明.目的:初步探讨青蒿琥酯对迟发型超敏反应小鼠脾脏T淋巴细胞的免疫调节作用.方法:建立迟发型超敏反应小鼠模型,40只小鼠随机数字表法均分正常对照组、青蒿琥酯干预组、p-38MAPK抑制剂组、基质对照组进行实验观察.T淋巴细胞转化实验检测小鼠T淋巴细胞增殖水平;Western blot方法检测p38丝裂酶原激活蛋白激酶(p38MAPK)蛋白的活性表达.结果与结论:局部给药后青蒿琥酯明显减轻迟发型超敏反应小鼠耳肿胀、降低脾指数、抑制刀豆蛋白A诱导的T淋巴细胞增殖;同时减弱p38 MAPK的磷酸化活性表达.提示青蒿琥酯可以有效抑制小鼠迟发型超敏反应,其作用途径可能与抑制p38 MAPK信号通路有关.
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胶原诱导性关节炎大鼠滑膜组织中磷酸化p38与JNK通路及痹肿消汤的影响
背景:有研究报道滑膜细胞信号传导异常是类风湿关节炎发病的重要机制之一.目的:观察胶原诱导性关节炎大鼠中丝裂原活化蛋白激酶通路中磷酸化p38 和磷酸化JNK 的活化及痹肿消汤的影响.方法:将72 只SD 大鼠随机分为正常组、模型组、痹肿消汤组.模型组及痹肿消汤组大鼠足趾注射胶原蛋白乳剂制备胶原诱导性关节炎模型大鼠,10 d 后加强免疫,初次免疫后第14 天开始给痹肿消汤组大鼠每天痹肿消汤灌胃,模型组蒸馏水灌胃,正常组自由饮水.结果与结论:Western blot 检测结果显示,胶原诱导性关节炎大鼠中磷酸化p38 及JNK 的表达较正常组显著增高(P < 0.05).与模型组相比,痹肿消汤组能下调磷酸化p38 及JNK 蛋白的表达(P < 0.05).说明痹肿消汤可抑制类风湿关节炎中磷酸化p38及JNK 的高表达.
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双醋瑞因对白细胞介素1β诱导软骨细胞凋亡的影响
背景:双醋瑞因是一种新型的白细胞介素1 阻滞剂,其是否对软骨细胞的凋亡有抑制作用以及是否通过细胞信号转导通路发挥作用的基础应用研究较少.目的:观察双醋瑞因对体外白细胞介素1β 诱导大鼠关节软骨细胞凋亡的影响.方法:体外培养SD 大鼠关节软骨细胞,苏木精-伊红染色和Ⅱ型胶原免疫荧光染色鉴定软骨细胞,用白细胞介素1β 诱导大鼠关节软骨细胞凋亡模型,再用10-4,10-5,10-6 mol/L 双醋瑞因干预培养.结果与结论:10-4 mol/L 和10-5 mol/L 的双醋瑞因可降低白细胞介素1β 诱导的软骨细胞凋亡率(P < 0.01 和P < 0.05).10-5 mol/L 双醋瑞因能够显著抑制白细胞介素1β 诱导p38 磷酸化(P < 0.01).双醋瑞因干预的软骨细胞中p38 mRNA 的表达量较模型组下降0.38 倍(P < 0.01).结果证实,双醋瑞因能够抑制软骨细胞中p38 蛋白和基因的表达,从而抑制白细胞介素1β 诱导关节软骨细胞凋亡.
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脊髓压迫性损伤后p3 8MAPK信号转导通路的时间变化规律
目的:研究脊髓压迫性损伤后p38MAPK信号转导通路在其中的变化规律和可能的意义.方法:制备脊髓压迫伤动物模型,用Westerm blot检测伤后0,30 min,6,24,72 h组织中p38MAPK的变化情况.结果:脊髓损伤后局部组织中p38MAPK存在明显的变化规律:30 min时出现明显表达上调,6 h达到高峰,以后逐渐下降,而正常脊髓组织中未检测出明确的表达.结论:p38MAPK信号转导通路参与了脊髓损伤后的信号转导,其变化规律有可能对脊髓损伤的治疗具有参考意义.
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p38在H2O2诱导人皮肤成纤维细胞凋亡中的作用
目的 了解在H2O2氧化应激模型中,p38在人皮肤成纤维细胞凋亡中的作用.方法 实验分为3组,即对照组,氧化组,抑制剂组.氧化组给予终浓度为730 μmoL H2O2刺激12 h;干预组在同样刺激前用p38抑制剂SB203580与细胞共培养1 h.分别在刺激后的10 min和1 h用Western Blot方法检测p38蛋白含量.在刺激后的12 h,用比色法检测Caspase-3活性,用Hoechst 33342荧光染色、流式细胞分析仪检测细胞凋亡.结果 刺激10 min后,氧化组P-p38明显高于对照组和抑制剂组,刺激1 h后,P-p38未检测出.刺激12 h后,Hoechst 33342荧光染色氧化组出现明显的细胞凋亡形态学改变,抑制剂组凋亡比例低于氧化组;氧化组 Caspase-3活性明显增强,抑制剂组低于氧化组.流式细胞仪显示对照组,氧化组,抑制剂组细胞凋亡比例分别为(4.20±1.25)%,(30.01±8.94)%,(15.56±3.80)%.结论 在H2O2氧化应激模型中、p38参与皮肤成纤维细胞凋亡发生,阻断p38通路可以显著减轻细胞凋亡程度.
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文冠果壳苷诱导人恶性黑色素瘤A375.S2细胞的凋亡及机制
目的 观察文冠果壳苷对人恶性黑色素瘤A375.S2细胞增殖抑制作用及诱导凋亡的机理.方法 采用四甲基噻唑蓝法(MTT法)检测化合物对细胞的生长抑制作用,光学显微镜及荧光显微镜观察细胞形态学变化,免疫印迹法(Western blotting)检测p-p38、p38、核转录因子-κB(nuclear factor kappa B,NF-κB) p65及核转录抑制因子-κB(nuclear factor kappa B inhibitor,I-κB)蛋白表达水平,检测细胞核内NF-κB p65表达水平.结果 文冠果壳苷可浓度依赖性地抑制A375.S2细胞增殖,并优于5-氟尿嘧啶(5-FU)；10 μ,mol· L-1文冠果壳苷作用于A375.S2细胞,形态学观察发现明显的凋亡小体和核固缩；Western blotting检测发现文冠果壳苷可时间依赖性地降低p-p38、p38、NF-κB p65及I-κB的蛋白表达水平；文冠果壳苷抑制NF-κB p65自细胞浆到细胞核的转位.结论 文冠果壳苷可能通过抑制NF-κB和p38的活化诱导人恶性黑色素瘤A375.S2细胞凋亡.
关键词： 文冠果壳苷 人恶性黑色素瘤A375.S2细胞 细胞凋亡 P38 NF-κB -
运动对大鼠骨骼肌p38活性的影响
目的:探讨运动对大鼠骨骼肌p38磷酸化、蛋白和基因表达的影响.方法:SD大鼠随机分为对照组和运动组.运动组分为1 h/d、1.5 h/d组,共7周,运动结束后24 h和48 h取材.测定葡萄糖和胰岛素浓度.采用Western blot法检测p38和phos-p38的表达,用RT-PCR法分析p38mRNA的表达.结果:与对照组比较,1 h/d运动24 h取材和1.5 h/d运动24 h与48 h取材p38磷酸化水平明显升高;1.5h/d运动24 h取材蛋白含量下降;p38mRNA升高发生于1 h/d和1.5 h/d运动24 h取材组.结论:运动改善p38磷酸化、蛋白和基因表达.
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谷氨酰胺对内毒素血症幼年大鼠小肠上皮ERK-2及P38活性影响
目的 观察谷氨酰胺(Gln)对幼年大鼠内毒素血症时小肠上皮信号转导通路ERK、P38活性的影响,探讨谷氨酰胺对内毒素血症幼年大鼠小肠上皮的保护机制.方法 选清洁级18日龄Wistar大鼠90只,按腹腔注射药物不同、注射时间不同分为:生理盐水组(NS组,n=10),内毒素组(LPS组,n=40),谷氨酰胺组(Gln组,n=40)；后两组又分为2,6,24及72 h共4个时间点,每个时间点10只,在各指定时间点免疫组化方法确定ERK-2以及P38蛋白的表达.结果 LPS组各时点ERK-2,P38蛋白表达均较NS组增强,差异有统计学意义(P＜0.01)；Gln组各时点ERK-2,P38蛋白表达趋势与LPS组一致,但明显低于LPS组(P＜0.05)；且各组ERK-2表达均比P38明显增强,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 ERK-2、P38信号转导通路在内毒素血症表达均明显增强,谷氨酰胺可使其表达下调,且ERK-2表达比P38明显增强,很有可能ERK-2比P38在内毒素血症中及谷氨酰胺保护小肠损伤机制上更占有主要地位.
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牙龈卟啉单胞菌感染血管内皮细胞对NF-κB和p38MAPK信号通路的影响
目的 观察牙龈卟啉单胞茵(P.gingivalis)ATCC 33277和W83感染血管内皮细胞对NF-κB和p38 MAPK信号通路的影响.方法 建立体外P.gingivalis感染血管内皮细胞模型,蛋白质印迹技术和免疫荧光法检测NF-κB和p38 MAPK信号通路表达的变化;多组均数之间的比较采用重复测量资料的方差分析.结果 P.gingivalis ATCC 33277和W83感染血管内皮细胞后迅速导致p38 MAPK磷酸化、IκB-α降解及NF-κB p65核移位.结论 P.gingivalis感染血管内皮细胞导致NF-KB和p38MAPK信号通路的激活,在慢性牙周炎致病机制的研究中具有一定的提示意义.
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高压氧对神经病理性疼痛大鼠p38 MAPK信号通路的影响
目的：探讨高压氧对神经病理性疼痛大鼠p38 MAPK信号通路的影响，从而明确其作用机制。方法实验分为2部分，每部分选用30只SD大鼠，又随机分为3组：假手术组（S组）、坐骨神经慢性缩窄组（CCI组）和高压氧组（HBO组），每组10只。第一部分实验测定术后3，7，14，28 d疼痛行为学指标，并在术后28 d取脊髓标本Western blot方法检测磷酸化p38表达，免疫组化法检测P2X4受体；第二部分实验先对各组大鼠行腰段鞘内置管，并将p38 MAPK信号通路阻断剂（SB203580）连续注入蛛网膜下腔中，测定阻断p38 MAPK信号通路后3，7，14，28 d疼痛行为学指标及术后28 d免疫组化法检测P2X4受体。结果第一部分实验中CCI组、HBO组大鼠疼痛行为学评分较S组明显降低（P<0.05），且CCI组比HBO组降低显著（P<0.05）。CCI组、HBO组的磷酸化p38及P2X4受体含量较S组增加（P<0.05），且CCI组磷酸化p38及P2X4受体的表达比HBO组显著增加（P<0.05）。第二部分实验中大鼠p38 MAPK信号通路抑制后，CCI组、HBO组疼痛行为学评分无统计学差异（P>0.05），但与未给抑制剂第一部分实验的CCI组、HBO组比较明显增高（P<0.05）；CCI组及HBO组的P2X4受体表达比S组显著增高（P<0.05），但2组间比较无统计学差异（P>0.05）。结论高压氧可能通过P2X4受体介导的p38 MAPK信号通路影响神经病理性疼痛大鼠。
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17β-雌二醇对子宫内膜癌细胞增殖及p38表达的影响
目的:探讨不同浓度的17 β-雌二醇(E2)对雌激素受体(ER)阴性的JEC细胞和ER阳性的Ishikawa子宫内膜腺癌细胞系细胞的增殖及细胞内p38蛋白表达的影响.方法:选用人子宫内膜腺癌细胞系JEC和Ishikawa进行体外培养,加入含不同浓度E2培养液,以四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法和激光共聚焦扫描显微镜(CLSM)的方法,观察子宫内膜腺癌细胞系JEC和Ishikawa细胞的增殖活性及P-p38的表达.结果:①MTT法观察细胞增殖:10-7、10-8和10-9 mol/L E2作用JEC细胞4、5天后OD值与对照组比较有差异(P＜0.05),其中10-7 mol/L E2组在第5天OD值与对照组比较差异较显著(P＜0.01)；而不同浓度E2作用Ishikawa细胞均能促进增殖(P＜0.05).②共聚焦显微镜测定细胞内P- p38蛋白的表达:10-7mol/L的E2作用JEC 4、5天后可使细胞内P-p38表达增加,平均荧光强度值与对照组相比有统计学意义(P＜0.05)；10-7 mol/L的E2作用Ishikawa 3、4天后P-p38表达增加,与不加E2对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论:子宫内膜腺癌细胞系JEC细胞和Ishikawa细胞均可受到雌激素的调控,一定浓度的雌激素能促进ER阴性JEC细胞和ER阳性的Ishikawa细胞增殖,且均能使细胞内P-p38表达增加.
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p38 MAPK信号转导通路参与NO诱导兔关节软骨细胞凋亡
目的 探讨p38 MAPK信号转导通路在软骨细胞凋亡中的作用.方法 体外培养兔关节软骨细胞,一氧化氮(NO)供体NOC-18和p38 MAPK抑制剂SB203580作用于细胞24h,用AnnexinV-FITC/PI流式细胞术检测软骨细胞凋亡率,Western blot测定p38、磷酸化p38蛋白的表达水平.结果 与对照组比较,SB203580显著降低了NOC-18诱导的软骨细胞凋亡率(P＜0.05);NOC-18以浓度依赖的方式促进p38 MAPK的磷酸化,而SB203580能抑制其磷酸化(P＜0.05).结论 p38 MAPK通路参与了NO诱导的兔关节软骨细胞凋亡的信号转导.
