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差速贴壁分离法文献资料
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人心肌成纤维细胞的培养及免疫荧光鉴定
目的：：探讨和建立适用于人心肌成纤维细胞体外培养及鉴定的技术方法。方法：从将进行心脏手术患者体内取右心耳组织，用胰蛋白酶消化法消化分离细胞，再通过差速贴壁分离法收集心肌成纤维细胞，用含20%胎牛血清的DMEM培养液进行培养并传代，光学显微镜下观察心肌成纤维细胞基本形态特征的变化，波形蛋白(Vimentin)，α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)，Ⅷ因子(VWF)抗体对细胞进行免疫荧光鉴定。结果：形态学观察和免疫荧光鉴定显示，成功培养心肌成纤维细胞，纯度达95%以上。结论：胰蛋白酶消化法结合差速贴壁分离法及免疫荧光鉴定是一种简单有效的人心肌成纤维细胞培养方法。建立了一种纯度较高且保存了成纤维细胞自身增殖能力特点的人心肌成纤维细胞体外培养模型。
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原代心肌细胞培养方法的探讨
心肌细胞培养在许多研究领域中有重要意义,虽然已有心肌细胞培养方法的报道,但存在细胞存活率低、纯度不高等缺陷.我们改进了以往的心肌细胞制备方法,获得了比较满意的效果,现报道如下.1 材料和方法1.1 细胞的制备和培养取出生1～2 d内的SD大鼠(雌雄不拘),按改良的Harary的方法进行细胞分离[1].以0.05%异戊巴比妥钠腹腔麻醉,常规皮肤消毒,取心尖部组织,冷PBS冲洗3次,剪成1 nm3的小块,加入5倍组织体积的0.1%胰酶(Difco,1:250,PBS溶解),于35℃水浴搅拌(800r/min)分次消化,每次约10 min.
