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干扰生存素、RNA干扰文献资料
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shRNA干扰Survivin基因后胶质瘤细胞中Survinvin及mcm2的表达及意义
目的 观察小发夹状RNA (shRNA)干扰生存素(Survivin)对脑胶质瘤细胞株U251中Survivin 及微小染色体维持蛋白2 (MCM2)表达的影响.方法 通过脂质体介导对脑胶质瘤细胞株U251、转染Survivin shRNA质粒PG-sur(pGenesil-Suvrivin)及无意义shRNA质粒PG,采用RT-PCR、Western-blot分别对未转染组(U251)、转染无意义序列组(U251-PG)及转染干扰序列组(U251-sur)检测Survivin的mRNA及蛋白表达情况,流式细胞术(FCM)定量测定各组细胞的细胞周期和细胞凋亡,MTT检测细胞增殖能力.采用RT-PCR、Western-blot分别检测转染前后细胞MCM2的mRNA和蛋白的表达情况.结果 与其他两组比较,转染干扰序列组细胞Survivin基因的mRNA及蛋白表达抑制效果显著,细胞增殖能力降低,细胞周期G2/M期阻滞显著,细胞凋亡率升高(p＜0.05).MCM2的mRNA和蛋白表达显著降低.结论 靶向Survivin基因的特异性shRNA能够在体外明显抑制U251细胞的生长并诱导其发生凋亡及细胞周期阻滞.且本试验结果表明MCM2是一可靠的细胞增殖标记物,且与Survivin之间不是各自孤的,两者间可能起协同作用共同参与胶质瘤的发生.
关键词： 胶质瘤 干扰生存素、RNA干扰 凋亡
