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小鼠B淋巴瘤细胞系A20核转染的影响因素分析
目的 分析影响小鼠B淋巴瘤细胞系A20的核转染效率的因素,以提高转染效率.方法 2017年1—6月在武汉大学人民医院中心实验室和肾病实验实进行实验.以绿色荧光蛋白(GFP)作为报告基因,使用Nucleo-fector核酸转染方法分别转染4种外源基因即CD40、ARNO、C-ABL、JLP进入A20细胞,用流式细胞术和荧光显微镜分别检测转染效率,研究细胞转染时间和外源质粒大小对核转染效率的影响.结果 质粒大小在8 kb以下时转染效率均很高,质粒超过8 kb时转染效率较低,其中,ARNO组(目的基因长度为1366 bp)转染效率高,JLP组(目的基因长度为3976 bp)转染效率低,转染后4 h检测转染效率高,48 h时低.结论 核转染方法非常适合于悬浮细胞的转染.且相对于传统的脂质体转染等方式,核转染的方法能有效缩短转染时间.外源基因过大会导致转染效率低,控制外源基因的大小能有效提高转染效率.
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uc.12+A及其宿主基因SFP Q在小鼠B淋巴瘤细胞中的表达研究
目的 利用链特异性逆转录聚合酶链式反应(strand-specific reverse transcriptase-polymerase chain re-action,strand-specific RT-PCR)方法 ,检测超保守RNA uc.12+A及其宿主基因SFPQ在小鼠B淋巴瘤细胞(38B9、myc3)中的表达水平,并与普通RT-PCR方法相比较.方法根据uc.12+A的序列设计链特异性逆转录引物,以小鼠B淋巴瘤细胞的RNA为模板进行反转录获得cDNA.随后通过实时荧光定量PCR技术,检测uc.12+A在小鼠B淋巴瘤细胞中的表达水平,并与普通RT-PCR的表达结果 进行对比.在同样的淋巴瘤细胞株中通过RT-PCR与western blot检测宿主基因SFPQ的表达.结果在小鼠B淋巴瘤细胞株中,sfrand-specific RT-PCR检测到的uc.12+A表达较普通RT-PCR检测到的水平低,2种方法检测的uc.12+A在小鼠B淋巴瘤细胞中表达均显著高于小鼠正常B细胞中的水平.SFPQ在B淋巴瘤细胞中的表达亦显著高于正常B细胞.结论 uc.12+A与宿主基因SFPQ在小鼠B淋巴瘤细胞中的表达显著增高.
关键词： 超保守RNA SFPQ B淋巴瘤细胞 链特异性RT-PCR -
BAFF受体在人B淋巴瘤细胞中的作用研究
目的 测定B细胞活化因子(BAFF)受体在人B淋巴瘤细胞中的表达水平,探讨B细胞活化因子受体(BAFF-R)信号转导在人淋巴瘤细胞中的作用.方法 选取3种人B淋巴瘤细胞系Raji、Daudi、BALL-1,通过流式细胞术、实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)及Western blot检测BAFF的表达.结果 流式细胞术结果显示,在3种人B淋巴瘤细胞系中均检出BAFF-R阳性表达,qRT-PCR和Western blot检测显示,在3种人B淋巴瘤细胞系中,BAFF-R基因与蛋白表达水平上调.结论 人B淋巴瘤细胞系Raji、Daudi、BALL-1呈阳性表达,BAFF-R与B淋巴瘤细胞的生长、增殖关系密切.
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p27Kip1反义寡核苷酸对B淋巴瘤细胞WEHI-231细胞周期的影响
目的探讨p27Kip1在抗原受体介导的B淋巴瘤细胞WEHI-231细胞周期停止信号中的作用.方法用抗IgM抗体诱导WEHI-231细胞细胞周期停止.用合成的p27Kip1反义寡核苷酸抑制p27Kip1基因的表达.采用流式细胞仪,分析细胞核的DNA含量和细胞周期的变化.用体外激酶实验检测Cdk2的活性, Western blot检测Rb蛋白的磷酸化水平.结果合成的p27Kip1反义寡核苷酸能阻断抗IgM抗体诱导的p27Kip1基因表达的上调.用p27Kip1反义寡核苷酸处理WEHI-231细胞,可恢复抗原受体交联引起的周期素依赖性激酶Cdk2活性的降低,以及Rb蛋白磷酸化水平的下降,并使细胞周期恢复运转.结论 p27Kip1可能在抗原受体信号介导的WEHI-231细胞的细胞周期停止中发挥主要作用.
