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自噬基因微管相关蛋白1轻链3、 Beclin 1在饥饿大鼠心肌中的表达及意义
目的：观察饥饿模型大鼠心肌细胞中微管相关蛋白1轻链3（ LC3）及自噬基因Beclin 1的表达变化，探讨自噬机制在饥饿大鼠心肌中的作用。方法将42只健康雄性SD大鼠随机分为正常对照组（ n ＝6）和饥饿模型组（ n ＝36）。正常对照组正常饮食，饥饿模型组禁食但自由摄水，根据饥饿天数又分为1、2、3、5、7、9 d等6个亚组（ n ＝6）。各亚组在相应时间进行心脏标本提取并留存，采用免疫组化法和蛋白质印迹法检测心肌自噬蛋白Beclin 1和LC3水平变化。结果与正常对照组相比，饥饿模型组各时间点SD大鼠心肌的自噬蛋白LC3和Beclin 1阳性细胞数及蛋白表达都有不同程度的增加，差异有统计学意义（ P ＜0 B．01或P ＜0．05），饥饿模型各亚组之间自噬蛋白LC3和Beclin 1阳性细胞数及蛋白表达差异亦均有统计学意义（ P ＜0．01或P ＜0．05），且在饥饿2 d和7 d出现2个峰值。结论饥饿状态可通过激活心肌自噬机制参与心肌的病理改变过程。
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ERK1/2和PI3-K通路抑制剂对蛛网膜下腔出血大鼠海马区神经细胞自噬的协同作用
目的 通过观察联合抑制细胞外信号调节激酶(ERK 1/2)和磷脂酰肌醇3激酶(PI3-K)蛋白对神经细胞自噬的影响,探讨蛛网膜下腔出血(SAH)救治靶点.方法 将200只雄性SD大鼠按照数字表法随机分为假手术(Sham)组、模型(SAH)组、ERK1/2抑制剂U0126组、PI3-K抑制剂LY294002组、U0126+LY294002组.二次注血法制作SAH大鼠模型;HE染色观察海马区神经细胞的形态变化;实时荧光定量PCR法检测ERK1/2、PI3-K、自噬相关蛋白beclin-1和微管相关蛋白1轻链(LC3)mRNA的表达,免疫组化法检测海马区磷酸化ERK1/2、PI3-K、beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白的表达水平.结果 SAH组海马区神经细胞死亡率、ERK1/2、PI3-K、beclin-1 和LC3 mRNA以及磷酸化ERK1/2、PI3-K、beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白水平均高于Sham组(均P＜0.05);U0126组和LY294002组海马区神经细胞死亡率高于SAH组,而ERK1/2、PI3-K、beclin-1和LC3 mRNA以及磷酸化ERK1/2、PI3-K、beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白水平均低于SAH组(均P＜0.05);U0126+ LY294002组海马区神经细胞死亡率高于U0126或LY294002组,而ERK1/2、PI3-K、beclin-1和LC3 mRNA以及磷酸化ERK1/2、PI3-K、beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白水平分别低于U0126和LY294002组(均P＜0.05).结论 联合抑制ERK1/2和PI3-K通路激活可显著降低SAH后神经细胞自噬,加重神经细胞丢失.
