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硫酸脑苷酯活化Ⅱ型 NKT 细胞对支气管哮喘小鼠Ⅰ型 NKT 细胞活性的影响
目的：观察硫酸脑苷酯活化Ⅱ型自然杀伤(natural killer,NK)T 细胞对支气管哮喘(简称哮喘)小鼠Ⅰ型 NKT 细胞数量及活性的影响。方法将24只 BALB/c 小鼠随机分为对照组、哮喘组和硫酸脑苷酯组,每组8只。流式细胞术检测肺Ⅱ型及Ⅰ型 NKT 细胞的数量及分泌细胞因子水平；酶联免疫斑点吸附法检测脾Ⅱ型及Ⅰ型 NKT 细胞分泌细胞因子水平；CCK8试剂盒检测脾Ⅰ型 NKT 细胞的增殖能力。结果硫酸脑苷酯组小鼠肺Ⅱ型 NKT 细胞分泌 IL-4和γ干扰素(IFN-γ)水平明显高于哮喘组(P <0.01),但肺及脾Ⅰ型 NKT 细胞分泌 IL-4和 IFN-γ水平和脾Ⅰ型 NKT 细胞对α半乳糖神经酰胺的增殖反应明显低于哮喘组(P 值均<0.01)。结论硫酸脑苷酯活化Ⅱ型 NKT 细胞可以抑制哮喘小鼠Ⅰ型 NKT 细胞的活性。
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硫酸脑苷酯活化Ⅱ型NKT细胞对哮喘小鼠气道炎症的影响
目的：观察硫酸脑苷酯活化Ⅱ型NKT细胞对哮喘小鼠气道炎症的影响。方法：32只BALB/c小鼠随机分为对照组、哮喘组、硫酸脑苷酯治疗组和过继转移组，每组8只。对照组和哮喘组分别采用PBS和卵清白蛋白（ OVA）致敏和激发，硫酸脑苷酯治疗组和过继转移组采用OVA致敏，分别在激发前给予硫酸脑苷酯腹腔注射和硫酸脑苷酯活化的Ⅱ型NKT细胞尾静脉注射。分别采用HE和PAS染色检测肺组织学和气道杯状细胞；姬姆萨染色检测支气管肺泡灌洗液（ BALF）各细胞分类计数；ELISA法检测血清OVA特异性IgE和BALF中IL-4、IL-5水平；流式细胞仪检测肺Ⅱ型NKT细胞、IL-4＋和IFN-γ＋Ⅱ型NKT细胞的数量。结果：硫酸脑苷酯治疗组和过继转移组小鼠肺组织炎性细胞和气道基底膜杯状细胞减少。硫酸脑苷酯治疗组和过继转移组小鼠BALF中嗜酸细胞百分比、血清OVA特异性IgE和BALF中IL-4、IL-5水平明显低于哮喘组（均P＜0.05）。硫酸脑苷酯治疗组小鼠肺IL-4＋和IFN-γ＋Ⅱ型NKT细胞的数量明显高于哮喘组（均P＜0.01）。结论：硫酸脑苷酯可能通过活化Ⅱ型NKT细胞抑制哮喘小鼠气道炎症。
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硫酸脑苷酯负载的CD1d四聚体检测小鼠Ⅱ型NKT细胞
目的:建立一种检测小鼠Ⅱ型NKT细胞的方法.方法:将硫酸脑苷酯(sulfatide)与生物素连接的CD1d单体按摩尔比3∶1混合室温静置过夜,之后加入PE标记的链酶亲和素,室温孵育4h制成sulfatide/CD1d四聚体.然后应用流式细胞术(FCM)检测正常小鼠脾脏及肺脏单个核细胞中Ⅱ型NKT细胞的百分比(TCR-β+ sulfatide/CD1d四聚体+),以及小鼠脾细胞经sulfatide刺激后单个核细胞中的Ⅱ型NKT细胞的百分比.结果:正常小鼠脾脏及肺脏单个核细胞中Ⅱ型NKT细胞的比例分别为(0.875±0.096)％和(1.175±0.263)％；小鼠脾细胞经sulfatide刺激后的Ⅱ型NKT细胞的比例为(2.75±0.603)％,与正常相比明显增加(P＜0.01).结论:硫酸脑苷酯负载的CD1d四聚体是检测小鼠Ⅱ型NKT细胞的有效方法.
