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腺苷受体A1亚型对视网膜色素上皮细胞免疫调节功能的影响
目的 研究视网膜色素上皮细胞(RPE)主要是通过何种亚型的腺苷受体(ARs)来结合腺苷,及其对RPE功能的影响.方法 体外培养人ARPE-19细胞系,定量PCR检测4种腺苷受体(ARA1、ARA2A、ARA2B、ARA3)基因的表达;提取细胞膜蛋白,Western blot检测4种腺苷受体在RPE细胞膜上的存在.体外培养ARPE-19细胞至80％融合后随机分为A～E组.其中,A组为无干预对照组,B～E组分别给予ARA1拮抗剂DPCPX(50 nmol/L)、ARA2A拮抗剂SCH58261(100 nmol/L)、ARA2B拮抗剂MRS1754(100 nmol/L)及ARA3拮抗剂MRS1220(5μmol/L)干预.利用H3-腺苷进行放射性配体结合实验,计算各组细胞对腺苷的大结合容量(Bmax).以肿瘤坏死因子α(TNF-α)10μg/L及γ干扰素(IFN-γ)1000 U/mL联合干预体外培养的ARPE-19细胞,给予或不予ARA1激动剂(CCPA),酶联免疫吸附试验(ELISA)测定培养上清中白细胞介素(IL)-6、IL-10、转化生长因子β(TGF-β)、单核细胞趋化因子(MCP)-1、趋化因子C-X-C配体10(CXCL10,IP-10)的含量.结果 在ARPE-19细胞中即可检测到4种腺苷受体基因的表达,也可探测到其分子在细胞膜上的存在.A～E组ARPE-19细胞结合腺苷的Bmax(单位:fmol)分别为2.04±0.31、0.44±0.06、1.82±0.28、2.01±0.42及2.06±0.44,其中B组较其他各组Bmax均降低(P<0.01).以TNF-α及IFN-γ激活ARPE-19细胞,与对照RPE组比较,CCPA干预RPE组IL-6、MCP-1及IP-10的含量降低、IL-10的含量增加(P<0.01).2组TGF-β的含量差异无统计学意义.结论 ARA1对ARPE-19细胞结合腺苷的能力具有重要的调控作用,ARA1受体介导的信号可抑制ARPE-19细胞分泌促炎因子及驱化因子,具有潜在的免疫抑制作用.
