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小干扰RNA沉默p65基因对人脐静脉内皮细胞再灌注后促炎因子表达的影响
目的：通过小干扰RNA（siRNA）研究沉默p65对人脐静脉内皮细胞（HUVECs）再灌注损伤后肿瘤坏死因子（TNF）-α和细胞间黏附分子（ICAM）-1水平的影响。方法实验分正常+siRNA阴性转染组、模拟缺血再灌注+siRNA阴性转染组、正常+p65 siRNA转染组和模拟缺血再灌注+p65 siRNA转染组4组。采用逆转录-聚合酶链式反应和酶联免疫吸附法分别检测p65 siRNA对TNF-α、ICAM-1 mRNA和蛋白表达水平的影响。结果模拟缺血再灌注+siRNA阴性转染组的TNF-α和ICAM-1的mRNA表达水平（分别是4.96±0.16、3.33±0.30）均高于其他3组，模拟缺血再灌注+p65 siRNA转染组的ICAM-1 mRNA表达水平（1.87±0.21）高于正常+siRNA阴性转染组（1.58±0.15）和正常+p65 siRNA转染组（1.69±0.21，均P＜0.05）。模拟缺血再灌注+siRNA阴性转染组TNF-α、ICAM-1的蛋白表达水平[分别是（329.98±12.18）μg/L、（654.74±64.79）μg/L]均高于其他3组，模拟缺血再灌注+p65 siRNA转染组TNF-α、ICAM-1的蛋白表达水平[分别是（129.65±22.42）μg/L、（185.76±11.27）μg/L]均低于正常+siRNA阴性转染组[分别是（183.50±11.77）μg/L、（280.43±13.76）μg/L，均P＜0.05]。结论 p65 siRNA通过沉默p65抑制模拟缺血再灌注诱导的TNF-α和ICAM-1表达水平。
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四氢吡咯二硫代氨基甲酯对人脐静脉内皮细胞模拟缺血再灌注诱导炎症因子的影响
目的：通过四氢吡咯二硫代氨基甲酯（PDTC）研究核因子（NF）－κB对人脐静脉内皮细胞（HUVECS）模拟缺血再灌注后炎症因子表达的影响。方法分为五组对HUVECs进行培养，即对照组（正常培养基培养）、缺血再灌注组（模拟缺血培养液培养30 min后换正常培养液再培养4 h）、缺血再灌注＋0．1 mmol／L PDTC组、缺血再灌注＋0．25 mmol／L PDTC组和缺血再灌注＋0．5 mmol／L PDTC组。后三组均于模拟缺血再灌注培养前1 h在培养液中添加相应浓度PDTC。实时定量 PCR 和酶联免疫吸附法分别检测不同浓度 PDTC 对肿瘤坏死因子（ TNF ）－α、细胞间黏附分子（ICAM）－1 mRNA和蛋白表达水平的影响。结果模拟缺血再灌注刺激TNF－α、ICAM－1的mRNA表达水平显著升高（P＜0．05，P＜0．01）。同时，模拟缺血再灌注刺激HUVECS上清液TNF－α和ICAM－1蛋白表达水平显著升高（P＜0．05）。0．1、0．25、0．5 mmol／L PDTC 均显著降低模拟缺血再灌注所诱导的TNF－α和ICAM－1的mRNA表达水平（P＜0．05）。0．5 mmol／L PDTC显著降低模拟缺血再灌注所诱导的 TNF－α和 ICAM－1的蛋白表达水平（P＜0．05）。结论 PDTC通过沉默p65，抑制模拟缺血再灌注诱导的TNF－α和ICAM－1表达水平。
关键词： 四氢吡咯硫代氨基甲酯 模拟缺血再灌注 人脐静脉内皮细胞
