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酪氨酸激酶和磷酸酶及蛋白激酶C在As2O3调控NB4细胞和皮层神经元凋亡中的作用
目的研究蛋白酪氨酸激酶和蛋白酪氨酸磷酸酶及蛋白激酶C(PKC)在三氧化二砷(As2O3)调控白血病细胞和人脑皮层神经元凋亡中的作用,观察As2O3对人脑皮层神经元和白血病细胞的胞浆游离钙([Ca2+]i)浓度的影响.方法用Fluo-3/AM荧光探针标记人白血病细胞和人脑皮层神经元[Ca2+]i,激光共聚焦显微镜实时测定不同浓度As2O3干预后[Ca2+]i的变化并观察蛋白酪氨酸激酶和磷酸酶抑制剂对[Ca2+]i变化的影响.磷基转移法测定细胞膜和胞浆的PKC活性.琼脂糖凝胶电泳法观察细胞DNA的片段化.结果1 μmol/L的As2O3使NB4细胞的[Ca2+]i明显增高,而对人脑皮层神经元[Ca2+]i影响不明显.2μmol/L以上的As2O3引起两种细胞[Ca2+]i增高,此作用被磷酸酶抑制剂钒酸盐呈浓度依赖性促进,被蛋白酪氨酸激酶抑制剂金雀异黄素呈浓度依赖性抑制,2,5,10μmol/L钒酸盐作用240 s时NB4细胞的[Ca2+]i总增加率分别为(6.5±2.3)%,(21.7±2.1)%和(49.2±2.5)%;人脑皮层神经元为(6.7±2.1)%,(19.4±2.5)%和(52.3±2.7)%;2,5,10μmol/L金雀异黄素作用240 s时NB4细胞的总抑制率分别为(6.7±2.9)%,(25.6±2.5)%和(52.2±3.5)%;人脑皮层神经元为(7.8±3.1)%,(18.1±2.8)%和(51.3±3.3)%.1μmol/L的As2O3体外干预3 h,NB4细胞PKC活性开始明显升高,并随时间延长持续升高,24 h出现明显的DNA的片段化;而人脑皮层神经元无明显的PKC活性升高和DNA片段化.2 μmol/L As2O3体外干预6 h,人脑皮层神经元PKC活性升高,24 h出现DNA的片段化.结论蛋白酪氨酸磷酸化和去磷酸化参与了As2O3诱导凋亡的非特异性信号转导,同时涉及PKC的活化.As2O3触发[Ca2+]i升高与PKC的持续活化有关.白血病细胞和人脑皮层神经元对As2O3的耐受程度有剂量差异.
