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抑制c-Abl激酶调节桩蛋白酪氨酸磷酸化对通气损伤活体大鼠的保护效应
目的 探讨在活体机械通气损伤模型抑制c-Abl激酶是否可以减少桩蛋白酪氨酸残基位点Y31和Y118(Pxn Y31、Pxn Y118)磷酸化,从而阻断其下游效应分子血管内皮-钙黏蛋白(VE-cad)及Rho/Rho激酶活化所致的血管屏障功能紊乱.方法 90只健康雄性SD大鼠按随机数字表法分为9组,每组10只.假手术(Sham)组仅进行气管切开;保护性通气1 h、2 h组(PVT 1h、2h组)潮气量(VT)为6 mL/kg,呼气末正压(PEEP)为5 cmH2O(1 cmH2O=0.098 kPa);大VT通气1 h、2 h组(HVT 1h、2h组)VT为30 mL/kg,PEEP为0;p42/44丝裂素活化蛋白激酶(p42/44MAPK)抑制剂UO126和c-Abl激酶抑制剂AG957预处理1 h、2 h组分别于大VT通气前1 h腹腔注射UO1261 mg/kg或灌胃AG95710 mg/kg.各组于预定实验时间结束后处死大鼠,采集肺组织标本及支气管肺泡灌洗液(BALF),用伊文思蓝(EB)实验检测肺血管渗透性,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测BALF中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;镜下观察肺组织病理学改变,并计算弥漫性肺泡损伤系统(DAD)评分,计算肺湿/干重(W/D)比值;用比色法测定肺组织髓过氧化物酶(MPO)活性,用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测肺组织c-Abl Y245、Pxn Y31、Pxn Y118、VE-cad Y658、p42/44MAPK Y202/Y204、肌球蛋白轻链(MLC)及肌球蛋白磷酸酯酶目标亚基Y696(MYPT Y696)的磷酸化情况.结果 ①Sham组与PVT组肺组织无明显病理学改变,且两组间各指标均无明显差异;HVT组肺组织损伤严重,且DAD评分、肺W/D比值、EB渗出量、MPO活性和BALF中TNF-α 水平较Sham组及PVT组明显升高;给予AG957或UO126预处理后,上述指标均较HVT组明显降低.②HVT组肺组织各蛋白磷酸化水平较Sham组和PVT组明显增加,以2 h更明显;给予AG957预处理后2 h,肺组织蛋白磷酸化水平均较HVT组明显降低〔p-c-Abl Y245(灰度值):0.29±0.04比0.42±0.04,p-Pxn Y31(灰度值):0.51±0.03比0.70±0.05,p-Pxn Y118(灰度值):0.65±0.04比0.91±0.04,p-VE-cad Y658(灰度值):0.77±0.07比1.32±0.07,p-p42/44MAPK Y202/Y204(灰度值):0.38±0.06比0.61±0.03,p-MLC(灰度值):0.37±0.04比0.77±0.05,p-MYPT Y696(灰度值):0.54±0.05比0.87±0.06,均P<0.05〕;给予UO126预处理后2 h,肺组织p-VE-cad Y658表达较HVT组明显降低(灰度值:0.74±0.04比1.32±0.07),且p42/44MAPK及其下游效应分子MLC、MYPT的磷酸化水平亦明显降低〔p-p42/44MAPK Y202/Y204(灰度值):0.38±0.07比0.61±0.03,p-MLC(灰度值):0.37±0.04比0.77±0.05,p-MYPT Y696(灰度值):0.55±0.05比0.87±0.06,均P<0.05〕.结论 抑制c-Abl激酶可阻断Pxn Y31、Pxn Y118磷酸化,稳定黏附连接处的VE-cad,并有可能通过阻断Pxn-鸟嘌呤核苷酸交换因子H1(GEF-H1)-p42/44MAPK信号小体的形成而抑制Rho信号链的活化、MLC的磷酸化及继发的肺血管屏障渗透性增加.
