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制备及筛选文献资料
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抗类风湿人源单链抗体库的制备及筛选
目的 通过噬菌体展示技术构建抗类风湿人源单链抗体库,为其进一步的临床应用研究奠定基础.方法 提取患者外周淋巴细胞总RNA,逆转录合成cDNA,以人源免疫球蛋白H链和L链可变区的扩增引物,分别扩增出H链和L链可变区基因.采用SOE-PCR法将VH和VL片段随机拼接成sc Fv片段,并克隆入噬菌粒载体pCANTAB5E中,构建噬菌体单链抗体库.结果 初级库库容量为3×106,在大肠杆菌TG1中重组后得到1.2×106的次级抗体库.结论 本研究成功构建类风湿人源单链抗体库,拟为类风湿病的预防、诊断、治疗奠定基础.
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人源抗恶性疟原虫单链抗体库的制备及鉴定
目的 通过噬菌体展示技术构建人源抗恶性疟原虫单链抗体库(ScFv),从中筛选出高亲和力的抗体基因片段,为进一步单链抗体表达打下基础.方法 收集患者新鲜外周血,进行淋巴细胞分离和总RNA的提取,提取总RNA经RT-PCR扩增出入源抗体重链和轻链抗体库,采用用重叠延伸拼接法将VH与VL以Linker相连组装成单链抗体基因(ScFv),将ScFv基因片段连接至载体pCANTAB5E,转化大肠杆菌TG1感受态细胞,构建的鼠源性抗恶性疟原虫天然噬菌体抗体库.结果 从20个噬菌体克隆中筛选到15个具有弓形虫可溶性抗原结合活性的阳性克隆.结论 从外周血淋巴细胞中获取可变区基因,利用噬菌体抗体库技术制备人源抗恶性疟原虫单链抗体的策略是可行的.
