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基于计算生物学方法的小容量单域抗体库的构建及食品中雌二醇特异性抗体的筛选
目的 构建骆驼源单域抗体实体库和虚拟库,为快速筛选检测食品中小分子污染物的特异性抗体提供新方法.方法 通过基因克隆、一代测序、同源性分析的方法构建骆驼源单域抗体基因库,通过二级结构分析和同源建模的方法建立单域抗体的三维结构虚拟库,利用分子对接技术实现雌二醇特异性抗体的虚拟筛选,并以雌二醇小分子为靶标进行初步验证.结果 构建的小容量单域抗体库含有2000株抗体,每一株抗体的遗传背景、蛋白质结构及抗体抗原互补决定区(CDR)的信息清晰;通过分子对接得到结合雌二醇小分子能力高的一株抗体的半经验结合自由能绝对值为9.56;相互作用分析结果显示,单域抗体结构中和雌二醇小分子发生相互作用的主要为3个CDR区形成的loop结构,经间接ELISA验证,其和雌二醇结合的50％抑制率(IC50)值为20 ng/ml,检测限(LOD,IC1o)为4.097 ng/ml.结论 通过计算生物学和基因工程技术相结合的方法构建的骆驼源单域抗体库,针对食品中常见的激素类兽药雌二醇,可以筛选得到背景清晰、具有较高亲和力的特异性抗体.
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利用噬菌体抗体库技术制备人源化抗血小板膜糖蛋白基因工程抗体
近年来随着人们生活方式的改变,血栓性疾病正成为威胁人类生命健康的"头号杀手",发病率高居各种疾病之首,并有渐增趋势,是当代医学研究的重点和热点之一.
关键词： 唑菌体 抗体库技术 抗血小板膜糖蛋白基因工程抗体 -
提高抗体库容量和亲和力方法的新进展
抗体库为抗体工程带来了革命性的突破,其核心是将抗体的基因型与表型耦联,从抗体库中找到针对特异抗原的抗体基因.但是抗体工程发展所面临的两大难点是如何构建大库容量的抗体库和提高抗体的亲和力.抗体库方法和技术的出现使得改造工程抗体更方便、更有效.利用不同抗体库方法构建大库容量的突变抗体库,然后通过抗体库技术在体外模拟抗体亲和力成熟过程获得高亲和力的抗体.本文简要综述了抗体库方法和技术的新进展.
