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耐辐射奇球菌recF和recO基因的克隆表达与功能验证
目的 构建耐辐射奇球菌(Deinococcus radiodurans,Dr)recF和recO基因的原核表达重组子并在E.coli BL21(DE3)中表达,检测RecO和RecF蛋白能否提高Ecoli BL21(DE3)对紫外线辐射的抵抗能力.方法 采用PCR扩增Dr菌基因组中recF和recO基因片段,以质粒pET30b(+)为基础,构建重组质粒pET30b(+)-recF和pET30b(+)-recO,并转化到E.coliBL21(DE3)中,LPTG诱导重组RecF和RecO蛋白表达,表达产物采用SDS-PAGE鉴定;计算紫外辐照前后各组细菌生存率变化.结果 构建了pET30b(+)-recF和pET30b(+)-recO重组载体,经IPTG诱导后能在E.coli BL21(DE3)中表达RecF和RecO蛋白.结论 构建了原核表达重组质粒pET30b(+)-recF和pET30b(+)-recO,实现RecF和RecO在原核细胞中的表达,体外实验证明Rec0和RecF蛋白能提高E.coli BL21(DE3)对紫外线辐射的抵抗能力.
