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HPV18E6的感染及PCNA、p53的表达与子宫颈鳞状细胞癌的关系
目的 探讨HPV感染,PCNA、p53的表达与子宫颈鲜状细胞癌发生、发展的相关性及临床意义.方法 利用免疫组织化学的方法分别对42例子宫颈鳞状细胞癌患者进行组织学和HPV18E6、PCNA、p53的检测.结果 ①42例子宫颈鲜状细胞癌,角化型鲜状细胞癌30例(30/42,71.43%),未角化型解状细胞癌有12例(12/42,28.57%).)HPV18E6在子宫颈鳞状细胞癌中的表达率为73.81%(31/42),在角化型解状细胞疮中的表达率为76.67%(23/30),角化型高于非角化型鳞状细胞癌(50.0%,6/12,P>0.05),但无统计学意义.③PCNA在子宫颈鳞状细胞痊中的阳性表达率达 83.33%(35/42).p53在子宫颈鳞状细胞癌中的阳性表达率达42.86%(18/42).p53在有淋巴结转移的表达率76.0%(19/25)比无淋巴结转移的表达率高29.41%(5/17,P<0.05),有统计学意义.结论 ①HPV 18E6的高表达,是预测子宫预上皮异常增生、癌变的标志物.②HPV 18E6表达与PCNA的表达呈正相关.二者的表达促进了抑癌基因p53的激活.而p53的过表达,与淋巴结的转移呈正相关,预测肿瘤恶性程度高,预后差.
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HPV18E6真核表达载体的构建及其在HaCaT细胞的表达
目的:构建pEGFP-C2-HPV 18E6真核表达载体,观察其在HaCaT细胞中的表达.方法:采用RT-PCR法从HeLa细胞中扩增出带有Xho Ⅰ、EcoR Ⅰ酶切位点的HPV18E6基因片段,双酶切技术将HPV 18 E6基因全长片段克隆到真核表达载体pEGFP-C2上,PCR、双酶切、测序鉴定重组质粒;将重组质粒pEGFP-C2-HPV18E6通过脂质体瞬时转染HaCaT细胞,RT-PCR及融合蛋白绿色荧光观察,检测目的基因的表达.结果:双酶切及测序结果表明真核表达载体pEGFP-C2-HPV18E6构建成功,转染HaCaT细胞48h后可见绿色荧光蛋白的表达,RT-PCR可扩增目的基因条带.结论:成功构建了pEGFP-C2-HPV18E6真核表达载体,为进一步研究HPV18E6的生物学功能提供了帮助.
