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结核分枝杆菌Rv1009结构域多肽的免疫学特性研究
目的：探讨结核分枝杆菌Rv1009结构域多肽的免疫学特性。方法选取33只小白鼠按照融合蛋白免疫情况的不同分为Rv1009组、BCG组和生理盐水组,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测方式对三组小白鼠中的血清特异性抗体滴速情况进行观察。分离小白鼠的脾淋巴细胞后采用体外抗原刺激的方式和MTT比色法对小白鼠脾淋巴细胞增殖指数进行观察。采用ELISA方法检测淋巴细胞悬液中鼠源性γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-10(IL-10)、白细胞介素-12(IL-12)的产生水平。结果经过研究后发现,结核分枝杆菌Rv1009结构域多肽免疫小白鼠血清特异性抗体的滴速为1：13800,淋巴细胞增殖的指数为(2.42±0.17),明显高于生理盐水组小白鼠的淋巴细胞增值指数(P<0.05)。在ELISA检测方面,结核分枝杆菌Rv1009结构域多肽免疫组小白鼠的IFN-γ、IL-10、IL-12产生水平分别为(1422±31)、(502±10)、(310±12)ng/L,明显高于生理盐水组小白鼠的IFN-γ、IL-10、IL-12产生水平(P<0.05)。结论结核分枝杆菌Rv1009结构域多肽在体外实验研究的过程中效果更好,具有极强的临床研究价值。
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结核分枝杆菌Rv1009基因真核表达质粒的构建及表达
目的 构建结核分枝杆菌Rv1009基因真核表达载体.方法 PCR扩增Rv1009基因,测序正确后克隆入真核表达载体pCDNA3.1(-),重组质粒酶切鉴定正确后以阳离子聚合物转染P815细胞后,分别以RT-PCR方法检测mRNA表达和间接免疫荧光技术检测目的蛋白的表达.结果 构建了重组质粒pCDNA-Rv1009,RT-PCR结果证明Rv1009可在P815细胞中转录,用间接免疫荧光检测,表达有Rv1009蛋白的细胞着染.结论 成功构建了结核分枝杆菌Rv1009基因的真核表达载体pCDNA-Rv1009,Rv1009基因可以在P815细胞中表达.
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结核分枝杆菌Rv1009蛋白的免疫学特性
目的 研究原核表达的结核分枝杆菌Rv1009蛋白在小鼠体内诱导的体液和细胞免疫应答.方法 采用皮下包埋的方法,以预先转移到硝酸纤维素膜上的原核表达的Rv1009蛋白免疫小鼠(10只)3次,每次间隔2周.用间接ELISA法检测免疫小鼠血清特异性抗体的滴度.末次免疫完成后4周,处死3只免疫小鼠并分离脾淋巴细胞,体外经PPD(0.2 μg/孔)刺激后,用MTT比色法检测免疫小鼠脾淋巴细胞的增殖指数.用ELISA法检测脾淋巴细胞悬液中IFN-γ、IL-10及IL-12的水平.结果 Rv1009蛋白免疫小鼠血清特异性抗体滴度为1∶1 600,淋巴细胞增殖指数为2.46±0.28,IFN-γ含量为1 350±34 pg/ml,IL-10含量为512±15 pg/ml,均显著高于生理盐水对照组;IL-12含量与生理盐水阴性对照组相当,为112±13pg/ml.结论 Rv1009有可能作为新型结核疫苗的候选组分.
