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microRNA-21逆向调控RECK促进乳腺癌细胞侵袭转移的研究
目的：研究 microRNA-21参与乳腺癌侵袭转移的调控机制。方法采用实时定量反转录-聚合酶反应(RT-PCR)方法检测MDA-435、MDA-231和 MCF-7乳腺癌细胞株 microRNA-21的表达；采用 transwell方法测定上述三株乳腺癌细胞体外侵袭转移能力；人工合成 microRNA-21干扰序列,转染MDA-231、MDA-435乳腺癌细胞,观察对细胞侵袭能力的影响；应用 Western blot检测逆转诱导蛋白(RECK)的表达；采用荧光报告基因实验检测 RECK与 microRNA-21的结合情况。结果 MCF-7、MDA-231及 MDA-435细胞株中均具有 microRNA-21高表达,且表达量 MDA-435>MDA-231>MCF-7,其中,具有高侵袭特性的 MDA-435细胞具有高水平 microRNA-21的表达为(4.51±0.71), MDA-231细胞具有中等水平的 microRNA-21表达为(2.67±0.27), MCF-7细胞表达microRNA-21水平相对较低为(1.23±0.11),比较差异有统计学意义(P<0.01)。三株细胞中, MDA-435细胞侵袭力高为(425.4±35.0)细胞数/视野, MCF-7低为(142.7±13.4)细胞数/视野, MDA-231居中为(263.7±24.4)细胞数/视野,三组细胞侵袭力比较差异有统计学意义(P<0.01)。将 anti-microRNA-21分别转染入 MDA-231和 MDA-435细胞,与对照组比较,两种细胞株转染 anti-microRNA-21后分别引起56%和67%的 microRNA-21表达量降低,比较差异有统计学意义(P<0.05)。将anti-microRNA-21转染入MDA-231细胞,与阴性对照组比较, anti-microRNA-21引起了34%细胞侵袭数目的减少。将 anti-microRNA-21转染入 MDA-435细胞,结果表明 anti-microRNA-21引起68%侵袭细胞数目的下降。Western blot检测显示, microRNA-21表达下调, MDA-435细胞中 RECK表达明显增强；荧光素酶实验显示共转染 RECK和 anti-microRNA-21的 MDA-435细胞荧光酶活性增加38%。结论本研究提示 microRNA-21可促进乳腺癌侵袭转移,其作用可能与逆向调控 RECK有关。
