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大鼠胰岛细胞的分离纯化及培养
目的探讨大鼠胰岛细胞分离纯化和培养的方法.方法采用胰导管逆行灌注Hanks液分离成年大鼠胰岛,V型胶原酶消化,不连续密度梯度Ficoll 400纯化胰岛.用台盼蓝和双硫腙染色检测胰岛活性和纯度,葡萄糖刺激胰岛素释放试验检测胰岛功能.结果胰岛细胞的收获量为540±150个胰岛/胰腺,活性＞90%,纯度＞90%,高糖刺激后胰岛素释放量为低糖刺激的2倍多.结论胰导管灌注Hanks液,V型胶原酶消化和不连续密度梯度葡聚糖纯化胰岛,可以获取数量多,活性和纯度好的胰岛.
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对大鼠胰岛两种不同分离纯化方法的实验研究
目的选择佳鼠胰岛的制备方法.方法采用不同的胶原酶消化法及不连续密度梯度纯化法.结果 Dextran法和Ficoll法分离纯化出胰岛细胞成活率无明显差异,且价格相差数十倍.结论可以用Dextran纯化液替代Ficoll纯化液.
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大鼠胰岛分离纯化实验研究
目的 介绍一种大鼠胰岛分离纯化方法.方法 SD大鼠和Wistar大鼠共10只,以0.05% Ⅴ型胶原酶胆管灌注,经消化后用葡聚糖(dextran)不连续密度梯度法纯化胰岛.DTZ和AO/PI染色检测纯度及活性.结果 胰岛收获量为(930±168)个,Ⅴ型胶原酶灌注及不连续密度梯度法可获得纯度高、活性好胰岛.结论 以0.05%的胶原酶胆管灌注消化的方法可得纯度高、活性良好的胰岛.
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成年大鼠胰岛的分离纯化及体外培养
目的:探讨大鼠胰岛细胞分离纯化及体外培养方法. 方法:胆总管内逆行灌注胶原酶Ⅴ,分次短时间消化胰腺,Ficoll 400间断密度梯度法纯化胰岛,所得胰岛进行培养鉴定. 结果:大鼠胰腺消化后胰岛产量为1050±59个胰岛/胰腺, Ficoll 400纯化后产量为498±60个胰岛/胰腺,纯度可达70%,细胞存活率在93%以上,胰岛素释放试验显示高糖刺激后胰岛素释放量为低糖时的1.91倍,表明胰岛细胞功能良好.培养第13天,约有30%～40%胰岛存活,并具有完整的形态结构,胰岛素分泌量约降为高值的30%.结论:该方法所得胰岛产量、纯度较高,功能良好,是一种较理想的胰岛细胞分离方法.普通培养条件适合胰岛的短期培养.
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大鼠胰岛细胞原代培养方法的改良
目的:探讨一种简单易行的大鼠胰岛细胞培养方法,获取尽可能多的高质量胰岛,并寻找进行体外实验研究的佳时间和条件.方法:运用胶原酶Ⅴ原位灌注法分离胰腺,Ficoll 400纯化胰岛细胞,双硫腙(DTZ)染色鉴定胰岛,运用倒置显微镜观察细胞生活状态,放免法检测胰岛素分泌考察胰岛功能.结果:每只大鼠可分离438±27个胰岛/胰腺,细胞存活率为92.3±2.3%,GSIS实验中胰岛素释放指数SI为3.25±0.26.结论:本分离纯化方法可获得数量多,质量高的胰岛细胞,为原代胰岛细胞的体外研究提供实验条件.
