您当前的位置：
首页 > 文献资料
所属专业：
重组胸腺素α1文献资料
-
重组胸腺素α1 pMAL-C2x-Tα1/TB1工程菌的构建与表达
目的 构建表达重组胸腺素α1(Tα1)的pMAL- C2x - Tα1/TBI工程菌.方法 将人工合成的Tα1序列进行PCR扩增,将扩增的片段和pMAL- C2x质粒载体分别经BamHI和EcoR I双酶切后,用T4 DNA快速连接酶连接构建pMAL- C2x - Tα1融合表达质粒,再经测序正确后,将重组体转化至大肠埃希菌TB1菌中,pMAL- C2x -Tα1/TB1菌在LB液体培养基中培养,经IPTG诱导表达麦芽糖结合蛋白与Tα1的融合蛋白(MBP- Tα1),采用Westernblot对MBP- Tα1进行鉴定.结果 pMAL-C2x-Tα1/TB1工程菌能有效表达MBP- Tα1,融合蛋白占菌体蛋白的33.6％,分子量约为45×103.结论 工程菌的成功构建和表达为重组Tα1的纯化、生物学活性等研究奠定了基础.
关键词： 重组胸腺素α1 基因克隆 质粒pMAL-C2x 融合表达 -
融合表达pGEX-Tα1的发酵研究
为了研究重组人胸腺素α1(Tα1)工程菌的发酵工艺,在NBS-MICROS15L自动控制发酵罐中,利用分批培养和补料分批培养技术培养含融合表达载体/pGEX-Tα1的大肠杆菌DE3(lys).采用分批培养,得到的终菌体密度OD600为8,GST-Tα1融合蛋白的含量为0.1g/L(发酵液);通过限制性流加补料,促进体系溶解氧能使发酵菌体密度及融合蛋白的含量显著提高,OD600可达32,融合蛋白的含量为0.7g/L(发酵液),且融合蛋白主要以可溶形式表达,为后续蛋白纯化工作提供了便利.本研究确定了周期短、产率高且稳定的发酵工艺,为工业化生产重组Tα1打下了基础.
