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mBSDL蛋白文献资料
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小鼠胆盐依赖脂肪酶蛋白原核表达载体的构建与蛋白制备
目的 构建小鼠胆盐依赖脂肪酶(BSDL)重组蛋白的大肠埃希菌原核表达载体,制备具有生物学活性的小鼠BSDL蛋白.方法 首先应用PCR合成mBSDL的cDNA序列,克隆至原核表达载体pET-28b,转化大肠埃希菌表达菌种BL21 (DE3)感受态细胞,IPTG诱导重组蛋白表达.使用His Trap FF crude柱纯化重组mBSDL蛋白.Western blot鉴定后采用尿素浓度梯度降低法进行透析复性.结果 成功构建原核表达载体pET-28b-mBSDL,实现该蛋白在E.coli BL21 (DE3)表达菌种中的高效表达,并且表达蛋白主要存在于包涵体中.Western blot示获得较好的纯化效果且纯化后成功复性.结论 成功构建mBSDL基因的原核表达质粒并制备具有活性功能的胆盐依赖脂肪酶,为进一步研究该蛋白的功能奠定了基础.
