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ERCC1基因异常表达与宫颈癌化疗耐药关系初步研究
目的探讨ERCC1基因过度表达与宫颈癌铂类药物化疗耐药之间的关系.方法采集宫颈癌患者术后标本,分为化疗敏感及耐药组.采用RT-PCR及Western Blot分别从核酸及蛋白水平检测ERCC1基因的表达.结果与化疗敏感患者相比,耐药患者ERCC1基因RNA及蛋白表达水平明显升高.结论ERCC1基因的异常表达,可能是宫颈癌铂类药物化疗耐药的原因之一.
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转染ERCC2的人脑胶质瘤细胞增加对烷化剂类抗癌药耐药性
目的探讨切割修复交叉互补基因2(excision repair cross-complementing rodent repair deficiency gene 2,ERCC2)在人脑胶质瘤耐药中的作用.方法采用来自p2E-ER2的2.4 kbEcoR Ⅰ片段和pcDNA3载体组建成pcDNA3ERCC2质粒.再用脂质体转染技术,将pcDNA3ERCC2质粒转入SKMG-4细胞.转染ERCC2的细胞用G418连续筛选2周.再从存活的细胞集落挑取单细胞进行克隆.克隆细胞进一步增殖并经RT-PCR和Western blot证实为稳定转染细胞用于下一步试验.转染不带ERCC2的pcDNA3载体作为对照.然后,采用改良的Sulforhodamine B(SRB)抗癌药筛选法,对稳定转染和亲代SKMG-4细胞进行细胞毒试验.结果细胞毒性试验结果显示转染ERCC2的SKMG-4胶质瘤细胞对顺铂和麻法林的耐药性明显增加.顺铂的IC90(μmol/L)在亲代SKMG-4、转染pcDNA3载体的对照SKMG-4和转染ERCC2的SKMG-4细胞分别为1.175、1和1.75;麻法林的IC90(μmol/L)分别为5、5.6和9.转染ERCC2的SKMG-4细胞与转染空载体的对照细胞相比较,顺铂和麻法林的IC90分别增加了75%和61%.结论转染ERCC2基因的胶质瘤细胞对顺铂和麻法林的耐药性明显增加,证明ERCC2在烷化剂类抗癌药物耐药中起重要作用.
关键词： 核苷酸切割修复 切割修复交叉互补基因2 化疗/耐药 胶质瘤
