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海洋放线菌酰基转移酶基因的克隆
对稀有海洋放线菌酰基转移酶进行基因的克隆得到目的片段.先设计两对酰基转移酶特异性引物,以总DNA为模板,然后通过PCR扩增的方法得到酰基转移酶的完整的基因片段,并将该片段插入载体pUC18中,以酶连的方法对重组质粒进行酶切,得到的片段进行验证,成功地获得了稀有海洋放线菌酰基转移酶的基因片段.
关键词： 海洋放线菌酰基转移酶 基因克隆 目的片段 pUC18 -
含绿色荧光蛋白报告基因pUC18筛选载体的构建
目的:以绿色荧光蛋白(GFP)基因为报告基因,将GFP基因克隆入pUC18建立大通量的筛选载体.方法:用PCR方法扩增目的DNA片段,碱裂解法小量制备质粒DNA,用限制性内切酶消化质粒DNA,用低熔点琼脂糖凝胶分离和纯化大片段DNA,GFP基因与pUC18连接,用氯化钙法转化感受态细胞,DNA序列测定,琼脂糖凝胶电泳,变性聚丙烯酰胺凝胶电泳.结果:pUC18-atg-GFP载体意外表达GFP蛋白,新合成的上游引物与原下游引物扩增GFP基因,克隆入pUC18构建pUC18-GFP载体,通过PCR、酶切鉴定和DNA序列分析,GFP基因的读码框架与原设计方案完全一致,该载体自身无GFP表达.结论:筛选载体内的GFP基因与克隆基因的融合基因可表达一种融合蛋白,在琼脂平板上含有该融合基因的克隆在紫外线激发下可发绿色荧光,因此,可表达基因能被挑选出来.
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限制性酶切pUC18质粒的AFM研究
应用原子力显微镜(atomic force microscope)对在云母表面铺展干燥的限制性内切酶(EcoR Ⅰ)作用前后的pUC18质粒DNA分子进行扫描.扫描结果显示,质量浓度为1μg/mL pUC18质粒DNA分子在呈现典型的闭环环状结构,局部可见颗粒状或粗线型聚合DNA片断.内切酶作用后,呈现网络状分布的细线状DNA分子.通过原子力显微镜对酶作用前后的质粒DNA分子的结构表征,对阐述酶切过程中DNA分子的结构变化机制打下基础.
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甲酸钠抗氧自由基损伤的研究
目的和方法：采用溶血试验，小鼠组织谷胱甘肽(GSH)、脂质过氧化产物(MDA)测定，采用质粒构象改变等方法检测甲酸钠的抗氧自由基损伤活性。结果：甲酸钠明显抑制H2O2致人红细胞(RBC)溶血作用(P<0.05或P<0.01)；明显提高小鼠肝GSH水平(P<0.05)；抑制小鼠肝、肾脂质过氧化的产生(P<0.05或P<0.01)；抑制受辐射质粒PUC18超螺旋构象百分率的下降(P<0.05或P<0.01)。结论：甲酸钠具有明显抗氧自由基损伤的活性，是一个良好的自由基清除剂。
