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牛疱疹病毒Ⅰ型PCR检测方法的建立及在牛源样本检测中的应用
目的 建立牛疱疹病毒Ⅰ型(BHV-1)PCR检测方法,用于临床牛样本中BHV-1的检测.方法 根据已发表的BHV-1 gB基因保守区域设计合成引物,建立BHV-1 PCR方法,对方法的特异性、敏感性、稳定性等进行方法学评价,并用建立的PCR方法检测64份牛临床样本.结果 建立的BHV-1 PCR检测方法与牛副流感病毒Ⅲ型(BPIV3)、猪伪狂犬病毒(PRV)、单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)、犬疱疹病毒(CHV)、均无交叉反应;可检测病毒小滴度为5lg TCID50/mL,对应的DNA模板浓度为5.26×102拷贝/μL;BHV-1 DNA在-30℃冰箱放置12个月仍可检测出目的条带.应用建立的方法检测145份牛源组织样本,BHV-1核酸阳性率为15.2％.结论 建立的BHV-1PCR检测方法具有快速、特异、敏感及稳定的特点,适合于临床牛样本BHV-1的感染的检测.
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牛病毒性腹泻病毒RT-PCR方法的建立及应用
目的 建立用于牛源样本中牛病毒性腹泻病毒(BVDV)双重RT-PCR检测方法.方法 选择已发表的BVDV 1型和BVDV 2型包含5' UTR区高保守区域基因作为靶基因,分别设计合成引物,建立双重BVDV RT-PCR方法,并对方法的特异性、敏感性、稳定性等进行方法学评价.同时用建立的RT-PCR方法检测了小牛血清、小牛血清去蛋白提取液、脾多肽注射液等41批次牛源性样本和64份牛血浆样本.牛源样本和64份牛临床样本.结果 建立的BVDV RT-PCR检测方法与牛副流感病毒III型(BPIV3)、猪瘟病毒(CSFV)、乙型脑炎病毒(JEV)均无交叉反应;检测BVDV 1型和BVDV 2型DNA模板低浓度分别为每微升8.87 × 102拷贝和6.31 × 102拷贝, BVDV 1型和2型cDNA在-30℃冰箱放置12个月仍可检测出目的条带.应用建立的BVDV RT-PCR方法检测41批次牛源样本和64份牛血浆样本,核酸阳性率分别为14.6%和29.7%.结论 建立的BVDV RT-PCR检测方法具有快速、特异、敏感及稳定的特点,可用于牛源样本携带BVDV核酸的检测.
