您当前的位置：
首页 > 文献资料
所属专业：
hGDNF文献资料
-
人脑胶质细胞来源神经营养因子基因的克隆及测序
为研究人脑胶质细胞来源的神经营养因子(glial cell line-derived neurotrophic factor, GDNF)在神经系统疾病中的作用,根据GDNF的cDNA序列设计并合成引物,以流产胎儿脑组织为来源,分别提取RNA和基因组DNA作模板,经RT-PCR和PCR技术扩增人GDNF基因片段,采用DNA重组技术将其克隆于pGEM-T Easy载体中并测序.结果:RNA和基因组DNA体外扩增得到的片段均是410 bp,两者无差异.PGEM-GDNF经酶切鉴定正确,测序结果与Genebank比较基本相同.由于RNA和基因组DNA扩增得到的片段大小相同,证实该基因片段内无内含子插入,该片段可用于真核及原核表达.
-
人胶质细胞源性神经营养因子(hGDNF)成熟肽基因的克隆及原核表达
目的分离人胶质细胞源性神经营养因子(hGDNF)成熟肽基因,并在E.coil中获得表达.方法以人的白细胞基因组DNA为模板,合成特异引物,采用PCR技术分离得到hGDNF成熟肽基因,并构建表达载体pET-21a(+)-hGDNF,转化大肠杆菌BL21(DE3),分别用IPTG和乳糖诱导表达,SDS-PAGE电泳检测hGDNF蛋白表达.结果PCR扩增出了400 bp的DNA片段,构建的表达载体pET-21a(+)-hGDNF经酶切、PCR鉴定均出现400 bp左右的条带,测序结果正确,用IPTG或乳糖诱导转化菌均有15kd大小的目的条带,表达的目的蛋白占菌体总蛋白30%以上,以包涵体形式存在.结论克隆得到人GDNF成熟肽基因并在大肠杆菌中得到了高效表达.
