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原矛头蝮蛇毒的抗凝作用
目的 研究原矛头蝮蛇毒(PMV)对血液系统的作用.方法 将PMV 0.2 mg· kg-1一次性尾静脉注射给予SD大鼠.注射后0.5,1,3,6和24 h分别取下腔静脉血,制备抗凝全血、抗凝血浆和富血小板血浆(PRP).利用血细胞计数板对抗凝全血和PRP进行血小板计数;将抗凝血浆用生理盐水稀释5倍,在412 nm测定血红蛋白含量;采用凝血酶时间(TT)、凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)和纤维蛋白原(FIB)含量测定试剂盒分别测定抗凝血浆的TT,APTT,PT和FIB含量;用发色底物法测定抗凝血浆酶切发色底物S-2251的活性.给昆明小鼠一次性尾静脉注射PMV 0.28 mg·kg-1,在0.5,1,3,6和24 h测定尾部出血时间.结果 给予PMV 0.2 mg· kg-1 30 min大鼠抗凝全血血小板计数减少至正常对照组的1/3(P＜0.01),PRP中血小板计数减少至正常对照组的1/20(P＜0.01),抗凝血浆血红蛋白含量增加约6倍(P＜0.01);给予PMV 6 h APTT明显延长(P＜0.05),3和6hTT明显延长(P＜0.01),1和3hPT明显缩短(P＜0.01);FIB含量和抗凝血浆酶切发色底物S-2251的活性无明显变化.给予小鼠PMV 0.28 mg· kg-1 30 min小鼠尾部出血时间达(2341 ±742)s,较正常对照组小鼠(81±11)s明显延长(P＜0.01),1h逐渐缩短(P＜0.01),24 h仍未恢复至正常水平(P＜0.05).结论 PMV具有明显的抗凝作用.
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原矛头蝮蛇毒及其组分对凝血功能的影响
目的：研究原矛头蝮蛇毒(PMV)及其组分作用于血液循环系统的部分生物学活性,进一步探讨其毒性机制。方法采用 Sephadex G-75凝胶层析方法分离不同分子质量范围的蛋白组分 FⅠ, FⅡ和FⅢ。贫血小板血浆调节富血小板血浆使血小板为3×1011 L-1,血小板悬液分别与 PMV, FⅠ, FⅡ和 FⅢ0.03 g??L-1预孵育5 min,血小板聚集仪测定 PMV 及其组分诱导血小板聚集活性；PMV, FⅠ, FⅡ和 FⅢ0.05 g??L-1分别与纤溶酶原0.1 U??L-1预孵育10 min,采用单一时间点测定和酶动力学测定 PMV 及其组分酶切发色底物S-2251的作用；将大鼠血浆与 PMV, FⅠ, FⅡ和 FⅢ1.0 g??L-1分别孵育5和30 min,测定凝血酶时间(TT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)和纤维蛋白原(FlB)水平；PMV, FⅠ, FⅡ和 FⅢ10,50和250 mg??L-1处理微血管内皮细胞24 h,倒置相差显微镜观察细胞形态,MTT 法检测细胞存活；PMV, FⅠ, FⅡ和 FⅢ0.1 g??L-1与含卵磷脂和不含卵磷脂的豚鼠红细胞悬液分别孵育不同时间,计算溶血率。结果与对照组相比,PMV 和高分子质量蛋白组分 FⅠ(>71 ku)诱导血小板聚集率显著升高〔(61.0±5.8)%和(56.9±5.9)% vs(12.4±4.1)%〕(P<0.01)。酶切发色底物 S-2251结果显示,PMV 与中分子质量组分 FⅡ(18～37 ku)具有酶切发色底物的作用(P<0.01)。 PMV 和 FⅠ可引起血浆凝固。与对照组相比,FⅡ组分和低分子质量蛋白组分 FⅢ(<10 ku)明显使 TT, APTT 和 PT 的时间延长(P<0.01)。PMV, FⅠ及 FⅡ导致内皮细胞解离悬浮,与对照组相比,细胞存活率下降,分别为(56.8±3.6)%,(71.6±3.8)%和(58.2±5.5)%。在无卵磷脂条件下,PMV 和 FⅡ可缓慢地引起红细胞轻度溶血；在卵磷脂参与下, PMV 和FⅡ引起豚鼠红细胞急剧溶血,与正常对照组相比,在0.5 min 内溶血率从(17.7±1.0)%分别升高至(81.0±4.0)%和(81.0±1.0)%(P<0.01)。结论 PMV 在体外表现出多方面的血循毒性质的活性,不同分子质量蛋白组分活性机制及作用不同。
