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全柱成像毛细管等电聚焦电泳法评价IL-15融和蛋白的电荷异质性
目的:建立全柱成像毛细管等电聚焦电泳(capillary isoelectric focusing-whole column imaging detection,cIEF-WCID)方法评价白细胞介素-15(IL-15)融和蛋白的电荷异质性.方法:通过比较5种不同的两性电解质,以及不同尿素浓度(0,3,6和8 mol· L-1)对实验结果的影响,优化建立了IL-15融和蛋白的全柱成像毛细管等电聚焦电泳方法.具体方法为采用3 mol·L-1尿素、0.35％甲基纤维素、4％两性电解质混合溶液作为样品缓冲液,聚焦电压为3 kV,预聚焦时间1 min,聚焦时间7 min.结果:利用新建方法测定了IL-15融和蛋白的等电点范围为6.00 ～6.71,分离检测到12个异构体,重复性实验中各异构体的峰面积百分比RSD为0.7％～7.4％,等电点RSD为0.0％～0.1％;稳定性实验中各异构体峰面积百分比的RSD为1.5％～10.5％,等电点RSD为0.0％～0.3％;3个不同批次IL-15融和蛋白的各异构体峰面积百分比和等电点基本一致.去N-糖基化及去唾液酸化实验结果表明,IL-15融和蛋白的电荷异构体主要是由N-糖基化不同产生,而酸性端异构体是由于唾液酸化程度不同产生的.结论:研究建立的全柱成像毛细管等电聚焦电泳方法可以有效分离IL-15融和蛋白的12种异构体,糖基化尤其是唾液酸化是引起电荷异质性的主要原因,新建方法对IL-15融和蛋白的质量控制有重要意义.
关键词： 全柱成像毛细管等电聚焦电泳 IL-15融和蛋白 电荷异质性 N-糖修饰 唾液酸
