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TwSMT2文献资料
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雷公藤甾醇C-24甲基转移酶(TwSMT2)的cDNA克隆及表达分析
24-烷基甾醇具有构成膜结构和调节植物生长发育的作用,本研究根据雷公藤悬浮细胞转录组数据,克隆得到雷公藤甾醇生物合成途径上的一个重要限速酶:甾醇C-24甲基转移酶(SMT),其cDNA全长1631 bp,开放阅读框1 080 bp,编码359个氨基酸.在线预测所编码蛋白的理论等电点为6.43,分子质量为40.0 kDa.生物信息学分析结果将此SMT基因归为SMT2家族.进一步构建pMAL-c2X-TwSMT2重组质粒并转化大肠杆菌BL21(DE3),茉莉酸甲酯诱导表达分析结果显示:相比于对照组,经诱导后的TwSMT2基因在24 h处有显著提高.SDS-PAGE及Western blot检测蛋白表达结果显示,IPTG可诱导表达出TwSMT2蛋白.本研究首次克隆得到TwSMT2基因,并获得重组蛋白,为进一步阐述雷公藤甾醇生物合成途径奠定基础.
