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金葡菌肠毒素SEC2的抗体制备及应用
生产厂家以金葡菌肠毒素C2(SEC2)的标示量作为金葡素注射液的质量控制标准,但其真正的含量由于滤液成分复杂而很难检测,本实验试图建立一种方便的鉴定金葡素注射液中的SEC2的方法.首先将重组的SEC2分别免疫BALB/c小鼠和新西兰兔,制备并纯化了单克隆及多克隆抗体.采用自制的抗体建立了检测SEC2的生物素一链霉亲和素酶联免疫吸附实验,检测目标蛋白的质量浓度范围为2～20 ng·mL-1,在检测范围内检测值的平均变异系数为5.08%,采用本法检测质量浓度分别为100 ng·mL-1的重组肠毒素(SEA/SEO/SEM/SEN/SEG/SEI),均呈现阴性反应,说明此检测方法的专一性较好.采用此方法对金葡素注射液中的SEC2含量进行了检测,发现SEC2标识量与实际含量存在一定的差距.
关键词： 金葡菌肠毒素C2 单克隆抗体 生物素-亲和素酶联免疫吸附实验 -
金葡菌肠毒素C2的单克隆抗体制备、鉴定及初步应用
目的:制备抗金葡菌肠毒素C2(SEC2)的单克隆抗体(McAb),并建立SEC2检测方法.方法:以金葡菌培养液中纯化的SEC2为抗原,免疫BALB/c小鼠,制备单克隆抗体;并对单克隆抗体的特性进行鉴定;利用纯化后的抗体建立了夹心ELISA定量检测SEC2方法,并进行了验证和初步应用.结果:筛选出4株稳定分泌抗SEC2抗体的杂交瘤细胞株,其免疫球蛋白亚类均为IgG1,除两株单抗的SEC2识别位点相同外,其余单抗均特异性识别SEC2的不同结合位点.建立的夹心ELISA定量检测法,特异性、灵敏度、重复性均较好,检测SEC2范围为0.5～20 ng/ml,回收率在97.8%～101%,变异系数为2%～5%.结论:本研究制备的抗SEC2的单克隆抗体,可用于建立了SEC2定量检测方法,为控制金葡素制品质量和金葡菌肠毒素研究提供了较实用的方法.
