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pEgr.p-TNFα的构建及其在NIH3T3细胞中的辐射诱导表达
目的分离和扩增Egr-1启动子,构建pEgr p-TNFα质粒,探讨不同辐射剂量对被转染的NIH3T3细胞中TNFα表达的影响.方法用PCR方法从小鼠基因组DNA中分离并扩增出Egr-1启动子,构建pEgr.p-TNFα表达质粒,脂质体介导的转染法转染小鼠NIH3T3细胞,用ELISA方法检测不同剂量X射线照射后的TNFα表达水平.结果本实验得到的Egr-I启动子序列与报道基本一致,Egr-1启动子和TNF α cDNA正确插入表达载体;各照射组在不同剂量X射线照射后8 h,TNFα表达水平均高于假照射组(P＜0.05～0.001).结论本实验分离和扩增的Egr-1启动子具有辐射激活和诱导下游基因表达增强的功能,低剂量辐射可激发并启动下游基因表达,在基因-放射联合治疗中有重要意义.
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12C6+离子诱导TNFα基因在SMMC-7721细胞中的表达
目的用Polyfect转染试剂将重组质粒pEgr-TNFα转染人肝癌细胞SMMC-7721,研究该重组质粒经12C6+离子作用后在细胞中的表达.方法用ELISA方法检测TNFα的蛋白表达,用RTPCR方法检测TNFα转录水平的变化.结果转染pEgr-TNFα后在SMMC-7721细胞中TNFα的蛋白表达量为2.06 ng/ml,2 Gy 12C6+离子照射后,表达量增高为2.11 ng/ml,明显高于未转染组和转染空载体组;RNA转录水平也明显增高,2 Gy 12 C6+离子照射后增高更明显.结论12 C6+离子联合重组质粒pEgr-TNFα,在被转染的SMMC-7721细胞中表达量明显增高.
关键词： 12 C6+离子 人肝癌SMMC-7721细胞 TNFα表达 -
电离辐射调控脂质体介导的TNFα基因在HeLa细胞中的表达
背景与目的:用脂质体LipofectaminTM2000介导重组质粒p-Egr-TNFα转染人HeLa细胞,研究该重组质粒在不同剂量γ射线作用下在细胞中的表达、细胞周期和细胞凋亡的变化.材料与方法:用ELISA方法检测TNFα的表达,并探讨剂量效应关系,用流式细胞术检测细胞周期的变化.结果:不同剂量60Co γ射线照射后,p-Egr-TNFα在HeLa细胞中表达量为(250～400)pg/ml,明显高于对照组;照射转染后的HeLa细胞周期出现明显的S期和G2M期阻滞,呈现剂量依赖性的增高,G0/G1比值则呈现剂量依赖性的下降.与之相对应,细胞凋亡率也呈现剂量依赖性的增高.结论:60Co γ射线可以调控脂质体介导的重组质粒p-EgrTNFα,在被转染的HeLa细胞中表达量明显增高,对细胞周期和细胞凋亡的影响也呈现剂量依赖性的效应关系.
